胃腸道間質(zhì)瘤全基因組染色體改變和蛋白表達(dá)的研究及意義.pdf

1、研究目的：胃腸道間質(zhì)瘤(Gastrointestinal suomal tumor，GISTs)是一類胃腸道最常見的間葉源性腫瘤，具有不確定的惡性潛能。應(yīng)用先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)研究相關(guān)基因的變化與蛋白表達(dá)是當(dāng)前人類惡性腫瘤研究的重要領(lǐng)域，對(duì)揭示腫瘤進(jìn)展機(jī)制，指導(dǎo)治療，預(yù)測(cè)預(yù)后有著非常重要的意義。本研究應(yīng)用比較基因組雜交技術(shù)(comparative genomic hybridization，CGH)對(duì)我院近年來的GISTs標(biāo)本進(jìn)行了研究

2、，并根據(jù)GISTs基因缺失、擴(kuò)增的改變，篩選p16、nm23等指標(biāo)，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)并選取有價(jià)值的分子生物學(xué)指標(biāo)為GISTs的遺傳學(xué)改變及預(yù)后預(yù)測(cè)提供重要的參考依據(jù)。 對(duì)象和方法：收集2006-2007年間25例新鮮GISTs標(biāo)本，-80℃保存，所有標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后組織學(xué)和免疫組化證實(shí)為GISTs，應(yīng)用比較基因組雜交技術(shù)檢測(cè)所有GISTs的細(xì)胞遺傳學(xué)改變；并根據(jù)GISTs基因缺失、擴(kuò)增的改變選擇有價(jià)值的分子標(biāo)記物(p16、PTE

3、N、p53、Cmyc、MDM2、nm23、E2F1、Ki-67)，采用免疫組化方法檢測(cè)近幾年來有隨訪資料的62例GISTs的表達(dá)情況。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5軟件進(jìn)行。 研究結(jié)果： 1.PD(progressive disease-死于該腫瘤或該腫瘤發(fā)生肝臟、腹膜等鄰近器官轉(zhuǎn)移稱為進(jìn)行性疾病)。 2.25例GISTs細(xì)胞染色體均有不同程度的變化，包括染色體全部或部分的擴(kuò)增或缺失，缺失多于擴(kuò)增，平均每個(gè)病

4、例缺失和擴(kuò)增的頻率分別為3.12和2.2。常見的缺失包括14q(60％)，1p(40％)等；常見的擴(kuò)增區(qū)域主要見于17q(40％)，5p(32％)等。 3.(1)62例GISTs中，p16在不同侵襲危險(xiǎn)性GISTs中表達(dá)有差異(P<0.001)，隨著GISTs侵襲危險(xiǎn)性的升高，p16表達(dá)強(qiáng)度降低。p16陽性細(xì)胞數(shù)小于50％的病例其PD病例數(shù)高于陽性細(xì)胞數(shù)50％-75％和陽性細(xì)胞數(shù)大于75％的病例，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p16蛋白表達(dá)強(qiáng)度之

5、間PD有差別(P<0.001)。 (2)PTEN陰性表達(dá)率19.4％，且其表達(dá)隨著腫瘤分級(jí)的增高，陰性例數(shù)增多。相關(guān)性分析表明，PTEN表達(dá)與危險(xiǎn)度分級(jí)呈顯著相關(guān)性(P<0.01)，但表達(dá)強(qiáng)度各組之間PD差異無顯著性(P>0.05)。 (3)62例GISTs中有26例p53蛋白陽性表達(dá)，隨腫瘤分級(jí)增高，陽性表達(dá)例數(shù)逐漸增多，腫瘤惡性度增高，p53表達(dá)增強(qiáng)，呈顯著正相關(guān)(P<0.01.)。p53(++)的病例其PD發(fā)生率高

6、于(-)病例(P<0.05)。 (4)Cmyc在GISTs中的陽性表達(dá)率為80.6％，腫瘤惡性度增高，Cmyc表達(dá)例數(shù)增多，Cmyc表達(dá)與腫瘤分級(jí)有關(guān)(P<0.001)。Cmye(+++)的病例與(+)和(-)的病例中PD發(fā)生率有差異(P<0.01)；(++)的病例與(+)和(-)病例中PD發(fā)生率有差異(P<0.05)。 (5)MDM2在各級(jí)間的陽性率分別為0.0％，0.0％，15.8％，61.1％，高度危險(xiǎn)組表達(dá)率明顯

7、高于其余三組，MDM2表達(dá)與腫瘤惡性度有關(guān)(P<0.05)。MDM2陽性細(xì)胞數(shù)(++)的病例PD發(fā)生率高于陽性細(xì)胞數(shù)(+)和(-)病例(P<0.05)。 (6)62例GISTs中，nm23均有不同程度的陽性表達(dá)，與腫瘤分級(jí)呈負(fù)相關(guān)性(P<0.01)。nm23陽性細(xì)胞數(shù)(+)的病例PD發(fā)生率明顯高于其余兩組(P<0.01)。 (7)E2F1蛋白在GISTs中的陽性率為71.0％，危險(xiǎn)度分級(jí)與E2F1表達(dá)強(qiáng)度之間有顯著相關(guān)性

8、(P<0.05)。E2F1(+++)的病例中PD發(fā)生率與其它組間有差異(P均<0.01)。 (8)Ki-67在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)GISTs病例中的增殖指數(shù)分別為0.0％、16.7％、36.8％、94.4％，Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)與腫瘤惡性度有關(guān)，相關(guān)性分析，二者有顯著性意義(P<0.05)。研究結(jié)論：1.GISTs染色體存在著非隨機(jī)的DNA拷貝數(shù)擴(kuò)增或缺失的位點(diǎn)，提示這些位點(diǎn)可能含有候選的致癌基因和抑癌基因。14q和22q的缺失是G

9、ISTs發(fā)生的早期事件，具有1p缺失的GISTs患者可能預(yù)后較差，9p的缺失和17q、20q擴(kuò)增可能是GISTs惡性進(jìn)展的標(biāo)志，8q和5p擴(kuò)增的預(yù)后意義有待考證。2.p16陽性細(xì)胞數(shù)大于50％，Ki-67增殖指數(shù)可能是GISTs有價(jià)值的預(yù)后參考指標(biāo)；nm23、Cmyc可以作為預(yù)測(cè)GISTs侵襲行為的指標(biāo)；E2F1可能是GISTs的一個(gè)不良預(yù)后因子，但還需結(jié)合其他的分子生物學(xué)指標(biāo)及更多樣本例數(shù)來綜合評(píng)估；MDM2敏感性較差，不適合作為GI