聯(lián)芐化合物抗真菌毒力作用研究.pdf

1、白色念珠菌(candidaalbicans)，通常存在于正常人的口腔、上呼吸道、腸道和陰道。一般情況下白色念珠菌是和人體共生的，當(dāng)外界環(huán)境變?yōu)橹虏l件，寄主和致病菌之間脆弱的共生關(guān)系就被打破，轉(zhuǎn)換為寄生關(guān)系，從而通過感染人體腸道或打破免疫平衡致病。臨床上使用的抗真菌藥物主要是唑類藥物和多烯類藥物，但他們都對人體有不同程度的毒副作用，同時唑類藥物耐藥性的產(chǎn)生給臨床給藥造成了很大的困難，新的抗真菌藥物的研發(fā)也就顯得越發(fā)重要了。苔蘚植物豐富的

2、次級代謝產(chǎn)物為新藥研發(fā)提供了很大幫助。
　　 苔蘚植物(Bryophyta)是僅次于被子植物的第二大陸生植物類群，在自然界廣泛分布，包括苔類(Liverworts)、蘚類(Mosses)和角苔類(Hornworts)三大類。從古代開始就已經(jīng)有關(guān)于苔蘚植物在醫(yī)藥方面應(yīng)用的記載，它被廣泛應(yīng)用于治療外傷、燒傷、感染、炎癥、肺結(jié)核、心血管疾病、扁桃體炎、支氣管炎以及中耳炎等疾病。近年來植物學(xué)家從苔蘚植物中分離得到250多種芳香族化合物，

3、其中聯(lián)芐化合物有很好的抗真菌、抗腫瘤和抗氧化作用。本課題的目的就是通過一系列實驗來闡明雙聯(lián)芐類化合物抗真菌的作用機(jī)制。
　　 隨著人們對綠色熒光蛋白結(jié)構(gòu)和作用機(jī)能的較全面認(rèn)識，綠色熒光蛋白已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。為了新抗真菌劑的研究開發(fā)和藥物的進(jìn)一步合理應(yīng)用，本文建立了研究病原菌的可視技術(shù)，將綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)化進(jìn)酵母細(xì)胞中與目的片段相連，利用綠色熒光蛋白基因與標(biāo)記基因的同步表達(dá)，判斷目的基因的表達(dá)，從而有利于探索新的、潛在的抗真菌藥物以及

4、其作用途徑的研究。不僅如此，綠色熒光蛋白標(biāo)記系統(tǒng)對農(nóng)業(yè)或環(huán)境有益微生物的定殖活動、作用方式及作用機(jī)理的研究具有重要意義。對多個基因進(jìn)行GFP標(biāo)記檢測后，發(fā)現(xiàn)法尼醇相關(guān)基因DPP3在白色念珠菌由酵母態(tài)向菌絲態(tài)轉(zhuǎn)換上起到了很好的抑制作用。提示法尼醇及其相關(guān)基因是聯(lián)芐類化合物抗真菌毒力發(fā)揮作用的關(guān)鍵介質(zhì)。
　　 法尼醇是一種群體感應(yīng)分子，研究表明法尼醇可以抑制真菌酵母態(tài)與菌絲態(tài)細(xì)胞之間的形態(tài)轉(zhuǎn)換和被膜的生長。DPP3可以編碼磷酸酯酶用

5、以促進(jìn)法尼醇焦磷酸鹽向法尼醇的轉(zhuǎn)變，因而我們在白色念珠菌缺陷株BWP17的DPP3基因上加了一個綠色熒光片段對DPP3基因進(jìn)行熒光標(biāo)記，從而進(jìn)一步從基因水平上檢測其在白色念珠菌形態(tài)轉(zhuǎn)換中所起的作用。本實驗通過HPLC-MS測定真菌體內(nèi)法尼醇的表達(dá)，共聚焦顯微鏡和實時定量PCR對Dpp3和DPP3進(jìn)行定量。實驗結(jié)果顯示雙聯(lián)芐可以通過上調(diào)DPP3從而促進(jìn)Dpp3的高效表達(dá)來實現(xiàn)法尼醇的積累，進(jìn)而抑制菌絲和被膜的形成。
　　 秀麗隱桿

6、線蟲作為一種模式生物在短時間內(nèi)可以大量繁殖、生命周期短、個頭小、容易操作而且只需要很少劑量的藥物就可以達(dá)到實驗要求，因此對于我們來說是一種理想的體內(nèi)操作模型。實驗中我們對臨床耐藥株，臨床敏感株和實驗室菌株進(jìn)行了測定，結(jié)果顯示化合物羽苔素F在8μg/ml和16μg/ml兩個濃度下可以將線蟲存活率提高到50％左右。
　　 本課題表明聯(lián)芐類化合物不僅可以在體外抑制菌的生長、菌絲和被膜的形成，也可以在動物體內(nèi)通過抑制菌的生長和菌絲的形成