西羅莫司對大鼠腎缺血再灌注損傷作用及機制的研究.pdf

1、目的：通過調(diào)整給藥劑量使大鼠體內(nèi)的西羅莫司谷濃度控制在4～8ng／ml，在此基礎(chǔ)上探討西羅莫司對腎缺血再灌注損傷作用的影響及其可能機制，為臨床使用西羅莫司提供理論依據(jù)。 方法： 64只SD健康雄性大鼠，隨機分為單純假手術(shù)組；西羅莫司假手術(shù)組；缺血再灌注組；西羅莫司缺血再灌注組。按照再灌注時間分為不同的觀察時相，缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組分為1天、3天、5天三個觀察時相，并據(jù)此將兩組又分為6個亞組，每個亞組8只大鼠

2、。單純假手術(shù)組和西羅莫司假手術(shù)組各8只大鼠，只觀察1天作為對照。實驗中單純假手術(shù)組和缺血再灌注組手術(shù)造模前3天開始給予生理鹽水：西羅莫司假手術(shù)組和西羅莫司缺血再灌注組手術(shù)造模前3天開始給予西羅莫司口服液，負荷劑量均為9mg／kg，以后每天早上八點灌胃1次給予維持劑量3mg／kg直至完成研究觀察。手術(shù)造模日大鼠灌胃給藥兩個小時后進行手術(shù)，采用先切除右腎，然后夾閉左腎動脈45分鐘致使左腎缺血，原位再灌注制作大鼠腎缺血再灌注損傷模型，單純假手

3、術(shù)和西羅莫司假手術(shù)組除不夾閉左腎動脈外，其余手術(shù)過程同造模組。分別于各觀察時相點處死大鼠并收集血液和腎組織標(biāo)本，并在處死的前一天晚上收集12小時的尿液。計算左腎系數(shù)(左腎重量(g)／大鼠重量(kg))；苦味酸法測定血清肌酐(Cr)含量評價腎功能的改變；比色法測定腎組織勻漿丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量和尿液中尿蛋白含量；放射免疫法測定血漿中內(nèi)皮素(ET)含量；免疫組化法測定腎組織細胞間粘附因子(ICAM-1)蛋白表達；HE染

4、色進行腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察。 結(jié)果： 1.左腎系數(shù)的改變西羅莫司假手術(shù)組的左腎系數(shù)與單純假手術(shù)組沒有明顯差異(P>0.05)。缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組每個觀察時相的左腎系數(shù)均明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)，但各個觀察時相點兩組問的左腎系數(shù)均沒有顯著性的差異(P>0.05)。 2.血清Cr測定結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組的血清Cr值明顯低于單純假手術(shù)組(P<0.01)。在1天時相點觀察，缺血再灌注組和西羅莫司缺

5、血再灌注組的血清Cr值均明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，但西羅莫司缺血再灌注組明顯低于缺血再灌注組(P<0.01)。在3、5天時相點，缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組的血清Cr值逐漸接近假手術(shù)組，但兩組間沒有顯著的差異(P>0.05)。 3.尿蛋白含量測定結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組的尿蛋白含量與單純假手術(shù)組相比沒有明顯差異(P>0.05)。缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組各個時相點尿蛋白的含量均明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，

6、兩組均1天時最高但在5天時還沒有達到假手術(shù)組水平。但各個時相點兩組間的尿蛋白含量均沒有顯著性的差異(P>0.05)。 4.血漿ET測定結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組血漿ET的含量與單純假手術(shù)組相比沒有明顯差異(P>0.05)。在1天時相點觀察，缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組的血漿ET均高于單純假手術(shù)組(P<0.01)，但西羅莫司缺血再灌注組明顯低于缺血再灌注組(P<0.05)，在3、5天時相點觀察，缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組的

7、血漿ET值逐漸接近假手術(shù)組，而且兩個時相點西羅莫司缺血再灌注組血漿ET含量明顯低于缺血再灌注組(P<0.05)。 5.腎組織NO測定結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組組織中NO的含量明顯高于單純假手術(shù)組(P<0.01)。在1天時相點觀察，缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組的組織NO的含量均高于假手術(shù)組(P<0.01)，但西羅莫司缺血再灌注組和缺血再灌注組無明顯差異。在3、5天時相點觀察，缺血再灌注組的組織中NO逐漸接近單純假手術(shù)組但均明顯高于

8、單純假手術(shù)組，而西羅莫司缺血再灌注組下降非常緩慢，5天時相點西羅莫司缺血再灌注組NO的含量明顯高于缺血再灌注組(P<0.05)。 6.腎組織MDA含量測定結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組的腎組織MDA含量與單純假手術(shù)組相比沒有顯著的差異(P>0.05)。在1天時相點觀察，缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組的腎組織MDA含量與假手術(shù)組沒有明顯的差異，但在3、5天時相點觀察，缺血再灌注組MDA含量明顯增高，與西羅莫司缺血再灌注組比較有顯著的差異

9、(P<0.05)。 7.腎組織HE染色結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組和單純假手術(shù)組的腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常，偶見腎小管上皮細胞出現(xiàn)腫脹。缺血再灌注組1天時，腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，腎小管上皮細胞形態(tài)和腎小管結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的病理改變，西羅莫司缺血再灌注組比缺血再灌注組的損傷有一定程度的減輕。3天、5天時相點觀察西羅莫司缺血再灌注組和缺血再灌注組損傷程度比缺血再灌注組1天有一定程度的減輕，但3天、5大時兩組間沒有明顯差異。 8.腎組織ICA

10、M-1蛋白表達結(jié)果西羅莫司假手術(shù)組和單純假手術(shù)組腎組織ICAM-1蛋白陽性表達沒有差異。在缺血再灌注組和西羅莫司缺血再灌注組各時相點的ICAM-1蛋白陽性表達水平均高于假手術(shù)組的表達(P<0.01)，1天時西羅莫司缺血再灌注組的腎組織ICAM-1蛋白表達水平顯著低于缺血再灌注組(P<0.05)，而在3、5天時兩組的腎組織ICAM-1蛋白表達水平均明顯高于假手術(shù)組，但兩組間均沒有明顯性差異。 結(jié)論： 1.實驗過程中成功的制

11、作了原位大鼠腎缺血再灌注損傷模型，缺血再灌注后出現(xiàn)明顯的腎臟功能和腎臟組織結(jié)構(gòu)的改變。 2.通過調(diào)整給藥劑量，能使西羅莫司的谷濃度控制在4～8ng／ml水平。 3.腎缺血再灌注損傷后尿蛋白的排出增多，西羅莫司對尿蛋白的排泄未見明顯影響。 4.西羅莫司對腎臟缺血再灌注損傷后1天有一定的保護作用，主要可能增加了腎小球的濾過率，但對3，5天影響不明顯。其保護機制可能與其下調(diào)組織中粘附分子表達，減少內(nèi)皮素和增加一氧化氮的