丹參對自殺基因旁觀者效應的增效作用及機制研究.pdf

1、基因治療就是將外源基因?qū)氲秸；虿∽兗毎?，利用其轉(zhuǎn)錄或翻譯產(chǎn)物發(fā)揮治療作用的一種方法，是分子生物學技術(shù)在臨床醫(yī)學中的一項重要應用。近年來基因治療技術(shù)發(fā)展迅速，有希望成為腫瘤的有效治療方法。但由于目前基因治療研究中目的基因的表達水平很低，而且還缺乏調(diào)節(jié)目的的基因表達組織的特異性、表達時序性的有效手段，己成為影響基因治療效果的嚴重障礙。在這種情況下，引入“自殺基因”，設計病變細胞的自殺機制，對于抗腫瘤具有重要的實際應用價值。 目

2、前應用最多的是HSV-tk基因，將HSV-tk基因?qū)肽[瘤細胞，配合以GCV治療，使該基因的表達產(chǎn)物將GCV轉(zhuǎn)化為GCV-TP，進而殺傷腫瘤細胞，而正常細胞則不被傷害。該療法的作用不僅僅引起被導入“自殺基因”的細胞死亡，而且可以通過“旁觀者”效應(bystandereffect)殺傷未導入基因的鄰近分裂細胞，顯著擴大其殺傷效應，這對惡性腫瘤的治療顯得尤為重要。 縫隙連接(GJ)是介導HSV-tk基因治療“旁殺傷效應”的重要途徑。

3、GJ除一些終末分化細胞如骨胳肌細胞，紅細胞和循環(huán)淋巴細胞外幾乎在所有動物中存在。GJ含有通道，它們位于兩細胞之間，可非選擇性通過小分子物質(zhì)，但不允許蛋白和核酸大分子通過。GCV的代謝產(chǎn)物通過細胞間的直接接觸進人tk-細胞，而GCV的磷酸化產(chǎn)物不能自由通過細胞膜，故推測細胞間的縫隙連接是GCV的磷酸產(chǎn)物的通道。進一步的實驗也證明了縫隙連接在腫瘤局部旁觀者效應中的作用. 目的：本實驗旨在以往研究的基礎上，將tk基因?qū)際22細胞，應

4、用HSV-tk/GCV系統(tǒng)進行小鼠肝癌自殺基因治療的體內(nèi)實驗，并聯(lián)合運用丹參注射液，觀察聯(lián)合治療的療效，并運用病理學技術(shù)及免疫組化等技術(shù)初步探討其機制，另外對大鼠的含藥(丹參注射液)血清和丹參注射液直接作用的H22細胞的CX-43的檢測，進一步探討其機制，為建立中西醫(yī)結(jié)合腫瘤基因治療方案提供必要條件。 方法：在已建立能穩(wěn)定產(chǎn)病毒的PT67/tk細胞株的基礎上，用NIH3T3測定病毒滴度。將此病毒感染小鼠肝癌細胞株H22，G418

5、篩選出抗性克隆命名為H22/tk。并將H22細胞與H22/tk細胞以4：1的比例接種Balb/c小鼠，建立移植瘤模型進行體內(nèi)實驗，應用前藥GCV及腹腔注射丹參注射液，16日后處死測腫瘤質(zhì)量，通過病理切片觀察組織的病理變化，應用免疫組化技術(shù)觀察腫瘤細胞CX-43的表達，應用細胞化學法和流式細胞術(shù)體外檢測藥物作用過的H22細胞的CX-43含量的表達。 結(jié)論：體內(nèi)實驗中，自殺基因系統(tǒng)聯(lián)合丹參注射液顯示出明顯的協(xié)同抗腫瘤效應；丹參注射液