去膽管及去門靜脈肝葉肝細(xì)胞功能分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立大鼠去膽管肝葉和去門靜脈肝葉自身對(duì)照模型，觀察去膽管肝葉及去門靜脈肝葉肝細(xì)胞形態(tài)變化及功能分化的現(xiàn)象和規(guī)律，探討去膽管肝葉的保留價(jià)值。 方法：切除大鼠肝左葉和尾狀葉，只保留方葉和右葉兩個(gè)肝葉。然后應(yīng)用氰基丙烯酸酯對(duì)其肝右葉膽管進(jìn)行栓塞并結(jié)扎來(lái)制備去膽管肝葉；對(duì)肝方葉行門靜脈結(jié)扎制備去門靜脈肝葉。分別設(shè)立未處理空白對(duì)照S組、單純栓塞并結(jié)扎右葉膽管BL組、單純結(jié)扎方葉門靜脈PL組和栓塞結(jié)扎肝右葉膽管，同時(shí)結(jié)扎方葉門靜脈的B

2、PL組，共四個(gè)組，觀察時(shí)間2周至2月；通過(guò)對(duì)各組動(dòng)物膽管和門靜脈分別灌注硫酸鋇明膠混懸液制備鑄型標(biāo)本，并運(yùn)用Micro-CT掃描來(lái)觀察兩葉肝臟膽道和門靜脈形態(tài)變化，了解兩葉之間是否存在交通支情況，來(lái)判別該模型的可行性。通過(guò)測(cè)定分肝靜脈血肝功能等化驗(yàn)檢查、組織病理學(xué)觀察、透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察以及肝組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究來(lái)探討相應(yīng)肝葉肝細(xì)胞形態(tài)及功能變化。 結(jié)果：(1)大鼠手術(shù)后在本觀察期內(nèi)存活率達(dá)到100％，無(wú)黃疸表現(xiàn)。肝葉大體形態(tài)觀

3、察和兩葉肝重量比指標(biāo)顯示，去膽管肝葉未見(jiàn)明顯的萎縮和纖維化，去門脈肝葉萎縮及纖維化明顯。(2)Micro-CT鑄型掃描可以直觀地展現(xiàn)膽管和門靜脈形態(tài)變化，未發(fā)現(xiàn)兩個(gè)肝葉之間存在交通支或側(cè)枝循環(huán)情況。(3)分肝靜脈血測(cè)定發(fā)現(xiàn)去膽管肝葉和去門脈肝葉血ALT、AKP存在不同程度的升高，白蛋白和纖維蛋白原有降低趨勢(shì)，血直間接膽紅素和總膽汁酸水平無(wú)明顯升高。各肝葉與S組相比多項(xiàng)指標(biāo)存在顯著性差異，自身對(duì)照顯示去門脈肝葉各指標(biāo)改變更明顯，去膽管肝葉

4、相對(duì)改變較小。(4)組織病理學(xué)檢查：去膽管肝葉肝小葉結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化。去門脈肝葉肝小葉結(jié)構(gòu)破壞隨術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)愈加明顯，但增生的膽小管數(shù)目增多。(5)透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察：去膽管肝葉肝細(xì)胞富含線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和游離核糖體；毛細(xì)膽管腔縮小，其內(nèi)微絨毛破壞明顯。去門脈肝葉肝細(xì)胞胞漿中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，其毛細(xì)膽管結(jié)構(gòu)顯示正常。(6)蚤白質(zhì)組學(xué)觀察：去膽管肝葉白蛋白、載脂蛋白A1、磷酸丙糖異構(gòu)酶表達(dá)無(wú)明顯降低，Z蛋白和Y蛋白降低明