GATA-4基因增加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抗缺氧能力的探討.pdf

1、目的：
　　研究鋅指轉(zhuǎn)錄因子GATA-4基因過表達對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）在低氧應(yīng)激環(huán)境下抗缺氧能力的影響。為探尋在缺氧環(huán)境下增加MSCs存活，提高MSCs細(xì)胞移植治療缺血性心肌病探索新的思路。
　　方法：
　　1.分離和純化健康Spraque-Dawley(SD)大鼠的MSCs細(xì)胞。
　　2.MSCs細(xì)胞體外擴增培養(yǎng)。
　　3.包裝GATA-4基因重組病

2、毒載體產(chǎn)生病毒，感染MSCs細(xì)胞并篩選穩(wěn)定過表達GATA-4的MSCs細(xì)胞。
　　4.通過蛋白免疫印跡（Western Blot）、定量PCR、免疫熒光組織化學(xué)分析等方法證明GATA-4基因在MSCs細(xì)胞內(nèi)的過量表達。
　　5.取轉(zhuǎn)染成功的MSCs細(xì)胞，進行低氧培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)氧濃度及轉(zhuǎn)染質(zhì)粒情況，實驗分三組，正常氧濃度組、低氧培養(yǎng)MSCGATA-4組和低氧培養(yǎng)MSCNull組。
　　6.低氧環(huán)境下培養(yǎng)48h，熒光顯微鏡

3、下觀察MSCs形態(tài)變化，測定培養(yǎng)細(xì)胞的MTT細(xì)胞增殖、膜聯(lián)蛋白V-PE凋亡檢測和細(xì)胞上清的乳酸脫氫酶（LDH）釋放來評價MSCs存活能力變化。
　　結(jié)果:
　　1.MSCs細(xì)胞體外培養(yǎng)生長均勻一致，方向較規(guī)律，呈平行或旋渦狀生長。
　　2.通過Western Blot、定量PCR和免疫熒光組織化學(xué)分析方法證明GATA-4基因在MSCs細(xì)胞內(nèi)的過量表達。
　　3.本實驗成功將GATA-4基因轉(zhuǎn)染入MSCs細(xì)胞，獲得

4、足量、高效過量表達GATA-4基因的MSCs細(xì)胞。
　　4.低氧培養(yǎng)48h后，GATA-4基因修飾組MTT攝取率達（92.67±4.65）%，低于正常氧組（100.00±4.82）%，但明顯高于MSCNull培養(yǎng)組[（78.87±4.91）%，P<0.05]；GATA-4基因修飾MSC后增加了細(xì)胞的存活。
　　5.低氧培養(yǎng)48h后，MSCGATA-4組膜聯(lián)蛋白V陽性細(xì)胞率（14.19±2.21）%，高于正常氧組（9.12±1

5、.61%），明顯低于MSCNull組26.02±2.01%（P＜0.05）。
　　6.低氧培養(yǎng)48h后，與正常氧組MSC[（100.00±6.42）%]相比較，低氧培養(yǎng)MSCNull組[（299.12±9.72）%]及MSCGATA-4組[（160.78±10.01）%] LDH釋放明顯增加(P<0.05)，在同樣低氧培養(yǎng)的條件下，相對于MSCNull組，MSCGATA-4組可見LDH釋放減少(P<0.05)。
　　結(jié)論：<