免脂肪干細胞與骨髓間充質干細胞成軟骨能力的比較.pdf

1、目的:比較兔脂肪來源和骨髓來源的兩種間充質干細胞的成軟骨能力。
　　 方法:選取六月齡新西蘭大白兔,取腹部脂肪,分離培養(yǎng)ADSCs并進行傳代。取兔雙側股骨,采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)BMSCs并進行傳代。使用倒置顯微鏡觀察兩種間充質干細胞的形態(tài)及生長增殖情況。比較兩種細胞的原代及2、3代的傳代時間。繪制3代ADSCs和BMSCs的生長曲線,測定兩種細胞的倍增時間并進行比較。選取兩種間充質干細胞的3代細胞進行成軟骨誘導,實驗分為四組

2、:ADSCs成軟骨誘導組(A1),ADSCs一般DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)組(A2),BMSCs成軟骨誘導組(B1),BMSCs一般DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)組(B2)。其中A1、B1為實驗組,A2、B2為對照組。倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)及生長增殖情況。培養(yǎng)14天后,實驗組行甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫組化染色,對照組行Ⅱ型膠原免疫組化染色。Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色灰度值評分法比較實驗組中A1、B1的成軟骨能力。
　　 結果:BMSCs原代細

3、胞呈聚集樣生長,而ADSCs原代細胞呈單個、散在生長。自第二代開始,BMSCs的生長方式與ADSCs一致,以單個、散在方式生長。單層培養(yǎng)時,這兩種間充質干細胞增殖迅速且穩(wěn)定,形態(tài)上均為成纖維細胞樣,呈梭形,沒有觀察到明顯的形態(tài)學差異。原代ADSCs傳代時間為6天,第2代、第3代的ADSCs傳代時間為3天。原代BMSCs傳代時間為10天,第2代、第3代的BMSCs傳代時間為5天。原代ADSCs傳代時間較原代BMSCs快4天。而第2代、第3

4、代的ADSCs傳代時間較同代BMSCs快2天。生長曲線示ADSCs增殖速度要快于BMSCs,ADSCs倍增時間為26h,BMSCs為36h。實驗組加入成軟骨誘導液后,細胞的增殖緩慢,細胞的形態(tài)由長梭形逐漸變成了多角形,或者圓形。而對照組細胞的形態(tài)無變化,皆為梭形。成軟骨誘導14天后,實驗組A1和B1甲苯胺藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色皆為陽性表達。而對照組Ⅱ型膠原免疫組化染色陰性表達。Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色灰度值評分示,B1組表達Ⅱ型膠