粒細胞集落刺激因子在鋰—匹羅卡品致癎大鼠模型中的神經元保護作用.pdf

1、研究背景：
　　癲癎是一種常見、慢性、復發(fā)性的神經科疾病，可以影響到各個年齡階段、共約3％的人群。癲癎，尤其是癲癎持續(xù)狀態(tài)可以對大腦多部位神經元進行有選擇性的損傷，特別是在海馬部位。這種神經元的損傷會使患者的認知（包括學習、記憶等）能力明顯下降，從而對其生活質量和社會適應性等造成很大影響；并且這種損傷可以成為癲癎復發(fā)的一個重要因素。當抗癲癎藥物或手術已經不能完全控制癲癎發(fā)作時，輔助性神經元保護劑的作用就體現(xiàn)出來了。G-CSF是最近

2、幾年研究比較熱的神經元保護劑，以其多靶點多途徑的功效引起大家的關注。我們的研究將闡明其是否在癲癎持續(xù)狀態(tài)下有神經元有保護作用，對學習、認知能否改善等。
　　目的：
　　通過神經生物學研究方法，探討粒細胞集落刺激因子在鋰－匹羅卡品致癎大鼠模型中的神經元保護作用及可能機制，為癲癎輔助治療提供新的思路。
　　方法：
　　1、實驗動物處理及分組。分組：Control組（給以鹽水注射）、G-CSF組（給予G-CSF注射）、

3、L-P組（給予鋰－匹羅卡品注射）、G+L-P組（給予G-CSF、鋰－匹羅卡品注射）。G-CSF給藥方法：G-CSF分別于制模前12h，癲癎終止時及終止后24h后給予。
　　2、癲癎模型：鋰－匹羅卡品誘導大鼠癲癎持續(xù)狀態(tài)。
　　3、致癎后14天進行水迷宮測試，觀察G-CSF對癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠的學習、記憶能力的改善。并用尼氏染色觀察各組大鼠海馬區(qū)神經元形態(tài)學變化。
　　4、致癎后3天、5天處死大鼠，腦組織制成切片，用T

4、UNEL法及免疫組織化學方法觀察這個時間點上的海馬神經元凋亡情況及凋亡相關分子的表達。
　　5、致癎后6小時，24小時，48小時處死大鼠，取大鼠海馬組織行Westernblot檢測，觀察AKT凋亡通路和ERK凋亡通路的相關分子表達情況。
　　6、從胎鼠大腦分離海馬神經元，體外培養(yǎng)，以外源性G-CSF為刺激劑，觀察其對神經元自分泌的影響。
　　結果：
　　1、致癎后15到20天時進行水迷宮測試，結果發(fā)現(xiàn)在測試第三天

5、和第四天時，上臺潛伏期在L-P組和G+L-P組之間有明顯差異。第六天時L-P組大鼠在目標象限停留時間較正常組短，但與G+L-P組間無明顯區(qū)別。
　　2、致癎后14天時的尼氏染色提示，L-P組海馬CA1區(qū)尼氏染色陽性細胞較正常組明顯減少；G+L-P組陽性細胞雖然和正常組比較亦有減少，但是較L-P組有明顯升高。
　　3、在制模后第三天、五天時，G+L-P較L-P組TUNEL陽性細胞明顯減少。
　　4、在制模后第三天、五天時

6、，G+L-P較L-P組BAX陽性細胞明顯減少。
　　5、在制模后第三天、五天時，L-P組BCL-XL分子表達明顯減少，而G+L-P組減少相對較少。
　　6、在制模后第三天，G+L-P較L-P組活化Caspase-3陽性細胞明顯減少，但這種變化在五天時沒能看到。
　　7、Westernblot檢測提示G-CSF處理延長了P-AKT的表達時間，但是在ERK通路上并未發(fā)現(xiàn)G+L-P組和L-P組之間的區(qū)別。
　　8、在一

7、定濃度的外源性的G-CSF作用下，海馬神經元自分泌G-CSF增加，形成正反饋。
　　結論：
　　1、粒細胞集落刺激因子（G-CSF）增強了癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠的學習、記憶能力。
　　2、粒細胞集落刺激因子（G-CSF）對癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠神經元有抗凋亡作用。這種抗凋亡作用與維持凋亡分子之間的平衡有關。
　　3、AKT通路在G-CSF對癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠神經元的抗凋亡作用中起著重要作用。而ERK通路作用尚不明確