粒細(xì)胞集落刺激因子在鋰—匹羅卡品致癎大鼠模型中的神經(jīng)元保護(hù)作用.pdf

1、研究背景：
　　癲癎是一種常見、慢性、復(fù)發(fā)性的神經(jīng)科疾病，可以影響到各個(gè)年齡階段、共約3％的人群。癲癎，尤其是癲癎持續(xù)狀態(tài)可以對(duì)大腦多部位神經(jīng)元進(jìn)行有選擇性的損傷，特別是在海馬部位。這種神經(jīng)元的損傷會(huì)使患者的認(rèn)知（包括學(xué)習(xí)、記憶等）能力明顯下降，從而對(duì)其生活質(zhì)量和社會(huì)適應(yīng)性等造成很大影響；并且這種損傷可以成為癲癎復(fù)發(fā)的一個(gè)重要因素。當(dāng)抗癲癎藥物或手術(shù)已經(jīng)不能完全控制癲癎發(fā)作時(shí)，輔助性神經(jīng)元保護(hù)劑的作用就體現(xiàn)出來了。G-CSF是最近

2、幾年研究比較熱的神經(jīng)元保護(hù)劑，以其多靶點(diǎn)多途徑的功效引起大家的關(guān)注。我們的研究將闡明其是否在癲癎持續(xù)狀態(tài)下有神經(jīng)元有保護(hù)作用，對(duì)學(xué)習(xí)、認(rèn)知能否改善等。
　　目的：
　　通過神經(jīng)生物學(xué)研究方法，探討粒細(xì)胞集落刺激因子在鋰－匹羅卡品致癎大鼠模型中的神經(jīng)元保護(hù)作用及可能機(jī)制，為癲癎輔助治療提供新的思路。
　　方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理及分組。分組：Control組（給以鹽水注射）、G-CSF組（給予G-CSF注射）、

3、L-P組（給予鋰－匹羅卡品注射）、G+L-P組（給予G-CSF、鋰－匹羅卡品注射）。G-CSF給藥方法：G-CSF分別于制模前12h，癲癎終止時(shí)及終止后24h后給予。
　　2、癲癎模型：鋰－匹羅卡品誘導(dǎo)大鼠癲癎持續(xù)狀態(tài)。
　　3、致癎后14天進(jìn)行水迷宮測(cè)試，觀察G-CSF對(duì)癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力的改善。并用尼氏染色觀察各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化。
　　4、致癎后3天、5天處死大鼠，腦組織制成切片，用T

4、UNEL法及免疫組織化學(xué)方法觀察這個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的海馬神經(jīng)元凋亡情況及凋亡相關(guān)分子的表達(dá)。
　　5、致癎后6小時(shí)，24小時(shí)，48小時(shí)處死大鼠，取大鼠海馬組織行Westernblot檢測(cè)，觀察AKT凋亡通路和ERK凋亡通路的相關(guān)分子表達(dá)情況。
　　6、從胎鼠大腦分離海馬神經(jīng)元，體外培養(yǎng)，以外源性G-CSF為刺激劑，觀察其對(duì)神經(jīng)元自分泌的影響。
　　結(jié)果：
　　1、致癎后15到20天時(shí)進(jìn)行水迷宮測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在測(cè)試第三天

5、和第四天時(shí)，上臺(tái)潛伏期在L-P組和G+L-P組之間有明顯差異。第六天時(shí)L-P組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間較正常組短，但與G+L-P組間無明顯區(qū)別。
　　2、致癎后14天時(shí)的尼氏染色提示，L-P組海馬CA1區(qū)尼氏染色陽性細(xì)胞較正常組明顯減少；G+L-P組陽性細(xì)胞雖然和正常組比較亦有減少，但是較L-P組有明顯升高。
　　3、在制模后第三天、五天時(shí)，G+L-P較L-P組TUNEL陽性細(xì)胞明顯減少。
　　4、在制模后第三天、五天時(shí)

6、，G+L-P較L-P組BAX陽性細(xì)胞明顯減少。
　　5、在制模后第三天、五天時(shí)，L-P組BCL-XL分子表達(dá)明顯減少，而G+L-P組減少相對(duì)較少。
　　6、在制模后第三天，G+L-P較L-P組活化Caspase-3陽性細(xì)胞明顯減少，但這種變化在五天時(shí)沒能看到。
　　7、Westernblot檢測(cè)提示G-CSF處理延長了P-AKT的表達(dá)時(shí)間，但是在ERK通路上并未發(fā)現(xiàn)G+L-P組和L-P組之間的區(qū)別。
　　8、在一

7、定濃度的外源性的G-CSF作用下，海馬神經(jīng)元自分泌G-CSF增加，形成正反饋。
　　結(jié)論：
　　1、粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）增強(qiáng)了癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力。
　　2、粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）對(duì)癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠神經(jīng)元有抗凋亡作用。這種抗凋亡作用與維持凋亡分子之間的平衡有關(guān)。
　　3、AKT通路在G-CSF對(duì)癲癎持續(xù)狀態(tài)模型大鼠神經(jīng)元的抗凋亡作用中起著重要作用。而ERK通路作用尚不明確