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文檔簡介
1、研究目的: 研究酶酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)、腦脊髓組織病理變化、血T淋巴細(xì)胞亞群比例的影響及作用機(jī)制,為MMF治療多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。 研究方法: (1)制作實驗動物模型:健康雌性Wi
2、star大鼠50只,隨機(jī)取6只作為正常對照組,其余44只進(jìn)行造模。用雌性豚鼠全脊髓勻漿和完全弗氏佐劑制成的完全抗原免疫Wistar大鼠制作EAE大鼠模型,以生理鹽水和完全弗氏佐劑注射的Wistar大鼠作為對照。 (2)動物模型鑒定:免疫當(dāng)日和免疫后所有動物每日進(jìn)行神經(jīng)功能評分(Duckers評分)直至造模成功。 (3)造模成功后大鼠隨機(jī)分為五組:MMF大劑量組:30mg/(Kg-d)灌胃給藥;MMF小劑量組:20mg/(
3、Kg.d)灌胃給藥;甲基強(qiáng)的松龍組:30mg/(Kg.d)尾靜脈注射給藥;模型組:等量生理鹽水灌胃;對照組:等量生理鹽水灌胃。給藥時間均為14d,每天觀察記錄神經(jīng)功能評分及體重變化。 (4)14d后心臟灌注處死大鼠,HE染色觀察腦脊髓組織病理變化,神經(jīng)髓鞘染色觀察腦脊髓中神經(jīng)髓鞘脫失情況,流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry,FC)觀察血CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD4+/CD8+比值、CD4+CD
4、25+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及CD4+CD45RA+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。 (5)采用SPSS13.0軟件行統(tǒng)計學(xué)處理,各組數(shù)據(jù)以x±s表示,采用方差分析,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1.造模成功率及神經(jīng)功能評分造模成功的大鼠為32只,造模成功率為72.1%,至分組時存活的EAE大鼠為25只。與對照組相比,各組EAE大鼠神經(jīng)功能評分明顯增加,體重明顯下降(P(0.01);與模型組相比,用MMF和甲基強(qiáng)的松龍
5、治療后大鼠神經(jīng)功能評分有所下降,體重增加,且大劑量MMF療效優(yōu)于小劑量MMF及甲基強(qiáng)的松龍(P<0.01)。 2.HE染色和神經(jīng)髓鞘染色觀察腦脊髓組織病理變化造模成功后HE染色可見EAE大鼠腦脊髓組織病理學(xué)變化主要表現(xiàn)為血管周圍有大量炎細(xì)胞浸潤,形成“血管套”樣改變,治療后各組EAE大鼠腦脊髓組織病理表現(xiàn)有不同程度的減輕,且MMF大劑量組減輕較明顯;神經(jīng)髓鞘染色可見EAE大鼠大腦白質(zhì)和脊髓內(nèi)神經(jīng)髓鞘脫失,治療后各組EAE大鼠腦脊
6、髓組織髓鞘脫失程度減輕,且MMF大劑量組變化較明顯。 3.流式細(xì)胞術(shù)觀察CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD4+/CD8+比值、CD4+cD25+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及CD4+CD45RA+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。 與模型組相比,治療后EAE大鼠血CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)減少,CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加,CD4+/CD8+比值降低,CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加,CD4+D45RA+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增
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