玉米瘋頂病病原菌快速檢測和病害控制技術(shù)研究.pdf

1、玉米瘋頂病(Crazytop)是由大孢指疫霉(Sclerophthoramacrospora(Sacc.)Thirum.,ShawetNaras)引起的一種具有毀滅性的玉米霜霉病病害。本試驗(yàn)基于1996年至2003年課題組對玉米瘋頂病研究所獲得的結(jié)果與進(jìn)展，開展了病原菌的常規(guī)檢測和分子檢測、病害的誘發(fā)及防治方面的研究： 1.采用I2-ZnCl2染色、苯胺藍(lán)染色、棉藍(lán)乳酚油染色、MTT染色等四種染色法檢測不同時(shí)期玉米病組織及病田中

2、病株種子、正常株種子中的帶菌狀況、帶菌部位、病菌的存活能力。四種染色劑均能夠?qū)⒉≡焰咦犹禺愋缘厝旧⑼参锝M織結(jié)構(gòu)明顯地區(qū)分開，達(dá)到快速的檢測目的。其中I2-ZnCl2染色方法能觀察到被染成橘紅色或紫紅色的鹿角狀菌絲體、吸器以及雄器，具有對卵菌特異性染色特點(diǎn)，能夠有效將大孢指疫霉菌絲體與其它常見真菌的菌絲體加以區(qū)別。 2.通過建立有效的提取微量DNA的方法，并利用通用引物ITS1/ITS4和卵菌特性引物DC6/ITS4進(jìn)行套

3、式PCR，獲得一個(gè)約900bp的片段，片段克隆測序后，經(jīng)在NCBI數(shù)據(jù)庫中的BLAST比對，進(jìn)行序列相似性分析，結(jié)果所測得序列同大豆疫霉菌和葡萄霜霉菌都存在非常高的相似性，可以確認(rèn)為卵菌，但暫時(shí)還無法認(rèn)定該片段即是大孢指疫霉，需要進(jìn)一步的重復(fù)實(shí)驗(yàn)。若結(jié)果肯定，預(yù)計(jì)可以設(shè)計(jì)特異性引物建立大孢指疫霉的分子檢測程序。 3.在溫室以不同的接種處理并采取苗期水淹的方式進(jìn)行了玉米瘋頂病的誘發(fā)試驗(yàn)，研究病田土壤、病殘?bào)w、病株果穗種子在病害傳播

4、中的作用，以及病害誘發(fā)的環(huán)境因素。結(jié)果表明，人工誘發(fā)玉米瘋頂病尚存在一些困難，卵孢子的萌發(fā)條件還未掌握。在田間，采取播種后至苗期多次淹水的方式，成功誘發(fā)了病害，感病品種的發(fā)病率達(dá)到45％以上。利用種衣劑甲霜靈錳鋅和殺毒礬對種子進(jìn)行包衣處理，在病害的藥劑防治方面取得了一定效果，但距高效防治還有距離。 通過對玉米瘋頂病病原菌檢測技術(shù)和病害防治技術(shù)的研究，為病原快速鑒定、致病規(guī)律研究、病害流行傳播、人工誘發(fā)及田間防治積研究積累了經(jīng)驗(yàn)并