空氣中3種常見病原菌快速定量檢測(cè)方法研究.pdf

1、微生物主要以氣溶膠的形式存在于空氣中，氣溶膠顆粒較小，容易造成空氣污染?？諝馕⑸锊粌H是室內(nèi)空氣的污染源，而且是影響室內(nèi)工作人員健康的一個(gè)重要因素。本論文通過免培養(yǎng)方法研究了實(shí)驗(yàn)室空氣細(xì)菌的組成和多樣性，在此基礎(chǔ)上建立了大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鮑曼氏不動(dòng)桿菌這三種空氣常見病原微生物的快速定量檢測(cè)方法。
　　采用微孔濾膜法采集實(shí)驗(yàn)室空氣環(huán)境中的微生物，根據(jù)濾膜孔徑、采樣時(shí)間等因素設(shè)計(jì)空氣樣品采集方案，發(fā)現(xiàn)適宜的濾膜孔徑為0.22μ

2、m，采樣時(shí)間和氣流速度對(duì)微生物的采集效率的影響不明顯，但需根據(jù)氣體流速選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r(shí)間，以保證得到足夠數(shù)量用于DNA提取的微生物；通過摻菌法比較3種DNA提取試劑盒和DNA快速提取液的提取效果，發(fā)現(xiàn)土壤基因組DNA快速提取試劑盒的提取效果較好，但對(duì)金黃色葡萄球菌 DNA提取效率較低，加入溶葡球菌酶和改進(jìn)操作后可滿足空氣樣品宏基因組DNA提取；采用16S rDNA克隆文庫(kù)法分析了空氣樣品細(xì)菌的多樣性組成：包括芽孢桿菌屬(Bacillus

3、)(60.3％)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)(1.2％)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)(19.4％)、副球菌屬(Paracoccus)(14.9％)、腸桿菌屬(Enterobacter)(0.7％)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)(0.7％)、貪銅菌屬(Cupriavidus)(0.5％)、賽托氏菌屬(Schlegelella)(0.5％)、鞘氨醇盒菌屬(Sphingopyxis)(0.5％)、

4、黃單胞菌屬(Xanthomonadaceae)(0.5％)、微枝形桿菌屬(Microvirga)(0.2％)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)(0.2％)、非培養(yǎng)的假單胞菌目(uncultured Pseudomonadales)(0.2％)和非培養(yǎng)的紅細(xì)菌目(uncultured Rhodobacterales)(0.2％)。根據(jù)多樣性分析結(jié)果，選擇大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鮑曼氏不動(dòng)桿菌為空氣中待測(cè)病原菌，大量調(diào)取這三種菌