姐妹染色單體分離相關(guān)基因在腫瘤細胞A549、SPC-A-1中的表達.pdf

1、腫瘤細胞的染色體數(shù)目畸變，又稱染色體不穩(wěn)定(chromosomalinstability,CIN)，是腫瘤細胞的特征性改變之一。以往由于對正常細胞染色單體分離機制認識有限，所以盡管人們很早就發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞的染色體數(shù)目異常，但對其發(fā)生機制一直缺乏深入研究。近年來，姐妹染色單體分離機制的研究有了較大進展，目前已知：姐妹染色單體分離主要由分離酶控制，分離酶(separase/ESP1)活性受到保全素(securin/PTTG)的抑制；在有絲分裂

2、后期，后期促進復合物(anaphase-promatingcomplex,APC)降解保全素，導致分離酶活化、水解粘合素(cohesin/SCC1)，姐妹染色單體在著絲粒處發(fā)生分離，進而移向兩極，分配到兩個子代細胞中。上述過程在腫瘤細胞中有何變化及它與腫瘤細胞染色體數(shù)目畸變有無聯(lián)系至今未見有系統(tǒng)研究。本研究擬通過觀察姐妹染色單體分離相關(guān)基因在腫瘤細胞A549、SPC-A-1細胞周期不同時相的表達模式探討上述姐妹染色單體分離機制與腫瘤細胞

3、染色體數(shù)目畸變的可能關(guān)系。 實驗目的： 觀察參與腫瘤細胞姐妹染色單體分離的相關(guān)基因在S、G2/M期的表達規(guī)律，探討這些基因在腫瘤細胞染色體數(shù)目畸變中的可能作用。 實驗方法： 1.采用雙胸苷同步化法將A549、SPC-A-1、MRC-5細胞同步化到S、G2/M期，獲取不同時相的細胞。 2.用實時熒光定量PCR精確檢測不同時相細胞中粘合素、分離酶、保全素、細胞周期素B1基因的表達。 3.用原位

4、雜交檢測不同時相細胞中粘合素、分離酶、保全素、細胞周期素B1基因的表達。 實驗結(jié)果： 觀察了分離酶、保全素、粘合素和細胞周期素B1基因在近二倍體和非整倍體細胞的細胞周期不同時相表達，結(jié)果顯示：無論是近二倍體細胞還是非整倍體細胞，其分離酶、周期素B1基因在G2/M期表達高于S期；粘合素基因在G2/M期表達低于S期；4而保全素基因則在近二倍體細胞和非整倍體細胞中顯示出完全不同的表達模式：在近二倍體細胞中，無論是G2/M期還是