類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者CD4+T細(xì)胞IL-8基因調(diào)控序列DNA甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性炎癥性的自身免疫性疾病。其發(fā)病機(jī)制不明，近年來，DNA甲基化已成為RA的研究熱點(diǎn)。在參與RA發(fā)病的眾多炎癥因子中，IL-8的表達(dá)異常已逐漸引起研究者的重視，但白細(xì)胞介素-8（Intertleukin-8，IL-8）在RA中過度表達(dá)的機(jī)制目前尚不明確。本研究通過觀察RA患者外周血IL-8的表達(dá)水平及CD4+T細(xì)胞中IL-8基因調(diào)控序列甲基化

2、狀態(tài)，探討其與IL-8基因表達(dá)水平的關(guān)系。
　　 方法:收集2009年06月至2010年1月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診RA患者21例，正常對(duì)照組15例。(1)檢測(cè)RA患者血沉及C反應(yīng)蛋白的水平;并對(duì)RA患者進(jìn)行疾病活動(dòng)度評(píng)估。(2)抽取RA患者及正常對(duì)照外周血60ml，密度梯度離心法分離RA患者、正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞，免疫磁珠分離外周血CD4+T細(xì)胞，提取CD4+T細(xì)胞DNA及RNA:①實(shí)時(shí)定量RT-PCR(real-t

3、imeRT-PCR)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞中IL-8的mRNA表達(dá)水平;②酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)檢測(cè)血清中IL-8的蛋白水平;③亞硫酸氫鈉測(cè)序法檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞中IL-8基因調(diào)控區(qū)域的甲基化狀態(tài)。
　　 結(jié)果:①RA患者CD4+T細(xì)胞中IL-8 mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照明顯升高（P＝0.028）;②ELISA結(jié)果顯示RA患者血清中IL-8的蛋白水平較正常對(duì)照明顯增加(P＜0.01)，且與CRP濃度呈正相關(guān)(P=0.0

4、16)，其中疾病活動(dòng)組較非活動(dòng)組外周血清IL-8蛋白水平明顯增高（P＜0.05）;③亞硫酸氫鈉測(cè)序結(jié)果表明RA患者CD4+T細(xì)胞中IL-8基因調(diào)控區(qū)域的甲基化水平顯著降低(P＝0.038)，有3個(gè)連續(xù)位點(diǎn)低甲基化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值分別為0.014，0.021，0.013），并與IL-8的mRNA表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P=0.024)。
　　 結(jié)論:(1)RA患者外周血CD4+T細(xì)胞中IL-8的mRNA表達(dá)量高于正常對(duì)照;(2) RA