類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者CD4+T細胞IL-8基因調(diào)控序列DNA甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性炎癥性的自身免疫性疾病。其發(fā)病機制不明，近年來，DNA甲基化已成為RA的研究熱點。在參與RA發(fā)病的眾多炎癥因子中，IL-8的表達異常已逐漸引起研究者的重視，但白細胞介素-8（Intertleukin-8，IL-8）在RA中過度表達的機制目前尚不明確。本研究通過觀察RA患者外周血IL-8的表達水平及CD4+T細胞中IL-8基因調(diào)控序列甲基化

2、狀態(tài)，探討其與IL-8基因表達水平的關(guān)系。
　　 方法:收集2009年06月至2010年1月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診RA患者21例，正常對照組15例。(1)檢測RA患者血沉及C反應(yīng)蛋白的水平;并對RA患者進行疾病活動度評估。(2)抽取RA患者及正常對照外周血60ml，密度梯度離心法分離RA患者、正常對照外周血單個核細胞，免疫磁珠分離外周血CD4+T細胞，提取CD4+T細胞DNA及RNA:①實時定量RT-PCR(real-t

3、imeRT-PCR)檢測CD4+T細胞中IL-8的mRNA表達水平;②酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)檢測血清中IL-8的蛋白水平;③亞硫酸氫鈉測序法檢測CD4+T淋巴細胞中IL-8基因調(diào)控區(qū)域的甲基化狀態(tài)。
　　 結(jié)果:①RA患者CD4+T細胞中IL-8 mRNA表達水平較正常對照明顯升高（P＝0.028）;②ELISA結(jié)果顯示RA患者血清中IL-8的蛋白水平較正常對照明顯增加(P＜0.01)，且與CRP濃度呈正相關(guān)(P=0.0

4、16)，其中疾病活動組較非活動組外周血清IL-8蛋白水平明顯增高（P＜0.05）;③亞硫酸氫鈉測序結(jié)果表明RA患者CD4+T細胞中IL-8基因調(diào)控區(qū)域的甲基化水平顯著降低(P＝0.038)，有3個連續(xù)位點低甲基化有統(tǒng)計學(xué)意義（P值分別為0.014，0.021，0.013），并與IL-8的mRNA表達呈顯著負相關(guān)(P=0.024)。
　　 結(jié)論:(1)RA患者外周血CD4+T細胞中IL-8的mRNA表達量高于正常對照;(2) RA