嚴(yán)重腹腔感染時腸黏膜β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶與腸上皮干細(xì)胞增殖分化機制關(guān)系的實驗研究.pdf

1、目的：本研究以腹腔感染不同時期的大鼠小腸為研究對象，觀察小腸黏膜β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶的時空變化規(guī)律和分布特征，探討β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4基因轉(zhuǎn)錄、翻譯水平的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制對小腸上皮干細(xì)胞的增殖發(fā)育可能發(fā)揮的生物學(xué)作用。 方法：健康成年Wistar大鼠40只，體質(zhì)量(250±20)g。隨機分為對照組(僅行單純剖腹手術(shù))、感染后12、24、48小時4組，每組10只。采用盲腸結(jié)扎加穿孔法(Cecal ligation pl

2、us puncture，CLP)制作嚴(yán)重腹腔感染模型，分別于CLP術(shù)后12、24、48小時處死，取距回盲部10cm處回腸組織4cm作檢測：2cm加入10％中性甲醛溶液中固定2小時，用于HE染色和免疫組織化學(xué)檢測β-連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶。另2cm標(biāo)本及時投入液氮罐，-70℃保存，待行RT-PCR檢測β-連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用完全隨機設(shè)計資料的方差分析，SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理

3、。 結(jié)果：(1)HE染色形態(tài)學(xué)顯示，對照組光鏡下小腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，腸絨毛排列整齊；實驗組光鏡下小腸黏膜和黏膜下層間質(zhì)水腫、血管充血，黏膜層有中性粒細(xì)胞浸潤，腸絨毛毛細(xì)血管充血，部分區(qū)域有黏膜上皮脫落，漿膜層明顯炎性滲出。 (2)應(yīng)用RT-PCR方法擴增感染后不同時期的β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4基因，結(jié)果顯示術(shù)后12小時mRNA水平迅速上升，與對照組比較分別為(0.74±0.10 vs 0.52±0.06，P<0.0

4、1)、(0.21±0.01 vs 0.19±0.01，P<0.01)；在術(shù)后24小時mRNA水平達(dá)到峰值，與對照組比較分別為(0.90±0.09 vs 0.52±0.06，P<0.01)、(0.28±0.02 vs 0.19±0.01，P<0.01)；隨后表達(dá)量逐漸下降，48小時mRNA表達(dá)量仍顯著高于對照組，即(0.80±0.09 vs 0.52±0.06，P<0.01)、(0.20±0.01 vs 0.19±0.01，P<0.05)

5、。 (3)免疫組織化學(xué)顯示，比較手術(shù)前后大鼠小腸隱窩中β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶的表達(dá)，見正常組織中β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶表達(dá)較弱；而術(shù)后12小時腸隱窩中β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶陽性細(xì)胞明顯增多，與對照組比較分別為(145.70±8.31 vs 134.80±10.56，P<0.05)、(73.20±11.23 vs 49.00±10.45，P<0.01)、(74.70±7.32 vs 65.80±5.8

6、3，P<0.05)；24小時后表達(dá)最強，與對照組比較分別為(178.20±10.51 vs 134.80±10.56，P<0.01)、(112.00±11.60 vs 49.00±10.45，P<0.01)、(83.70±8.27vs 65.80±5.83，P<0.01)；隨著時間的延長，β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶表達(dá)逐漸降低，到48小時小腸隱窩仍有表達(dá)，與對照組比較分別為(146.60±9.92 vs 134.80±10.56，

7、P<0.05)、(63.70±11.04 vs 49.00±10.45，P<0.01)、(76.70±7.75 vs 65.80±5.83，P<0.01)。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示手術(shù)前后β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶表達(dá)差異具有顯著的意義。 結(jié)論：從小腸組織內(nèi)β連環(huán)蛋白、T細(xì)胞因子4、溶菌酶的時空變化規(guī)律和分布特征來看，它們可能與小腸黏膜干細(xì)胞增殖分化密切相關(guān)。 (1)β連環(huán)蛋白與嚴(yán)重腹腔感染時腸黏膜的損傷修復(fù)密切相關(guān)。嚴(yán)重

8、腹腔感染W(wǎng)istar大鼠腸黏膜上皮損傷后β連環(huán)蛋白表達(dá)增高，而且損傷初期β連環(huán)蛋白水平上升迅速，可能與Wnt/β-catenin途徑及酪氨酸殘基的磷酸化與去磷酸化的調(diào)節(jié)有著密切聯(lián)系，導(dǎo)致腸上皮干細(xì)胞的增殖分化活性增強，從而促進(jìn)腸黏膜損傷修復(fù)。 (2)T細(xì)胞因子4可在一定程度上反映腸上皮干細(xì)胞增殖狀態(tài)，檢測T細(xì)胞因子4表達(dá)變化即可反映腸黏膜上皮損傷修復(fù)狀況。 (3)溶菌酶在潘氏細(xì)胞的表達(dá)可作為腸上皮干細(xì)胞增殖分化的標(biāo)志