JNK通路介導(dǎo)TGF-β1調(diào)控角膜基質(zhì)CTGF表達(dá)和創(chuàng)傷后瘢痕形成的作用研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文JNK通路介導(dǎo)TGF-β1調(diào)控角膜基質(zhì)CTGF表達(dá)和創(chuàng)傷后瘢痕形成的作用研究姓名：常媛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：吳欣怡20090510山東大學(xué)博士學(xué)位論文亂，形成瘢痕組織。正常的大鼠角膜基質(zhì)中有極少量C T G Fm R N A 表達(dá)，少量T G F - Bl m R N A 表達(dá)。創(chuàng)傷后大鼠角膜基質(zhì)中有大量的T G F - B1 及C T G F m R N A 表達(dá)，并在創(chuàng)傷早期開(kāi)始顯著增加，傷后第

2、3 天時(shí)基本達(dá)到高峰，但T G F —B1 表達(dá)下降速度比C T G F 快，在創(chuàng)傷后2 周基本達(dá)到正常水平。外源性T G F —B1 及C T G F 刺激T H S F 細(xì)胞2 4 h 后，M T T 結(jié)果顯示T G F - B1 和C T G F 均能夠明顯促進(jìn)T H S F 細(xì)胞增殖；用中和抗體封閉C T G F 后，T G F - B 1 和C T G F 誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖均被明顯抑制；3 n g ／m lT G F - Bl

3、刺激T H S F 細(xì)胞2 4 h 后，與對(duì)照組相比，C T G F 、C o lI Q1 m R N A 和C T G F蛋白的表達(dá)增加，T G F - B1 可誘導(dǎo)T H S F 細(xì)胞中C T G F 、C o l I Q1 m R N A 和蛋白的表達(dá)；C T G F 中和抗體封閉后T G F - Bl 促進(jìn)的I 型膠原表達(dá)受到明顯抑制。結(jié)論：T G F - B1 和C T G F 在角膜創(chuàng)傷后表達(dá)明顯增加，共同參與角膜基質(zhì)創(chuàng)傷修

4、復(fù)、促進(jìn)角膜瘢痕形成；T G F - B 1 通過(guò)調(diào)控C T G F 發(fā)揮作用，C T G F 是T G F —B1促角膜瘢痕形成的下游介質(zhì)。關(guān)鍵詞：c 1 I G F ：T G F - B1 ；角膜；創(chuàng)傷第二部分：T G F - B1 調(diào)控角膜基質(zhì)中C T G F 表達(dá)和瘢痕形成的信號(hào)通路研究目的：探討M A P K s 通路在T G F _ p 1 調(diào)控C T G F 表達(dá)促角膜瘢痕形成過(guò)程中的作用，尋求控制角膜瘢痕形成的靶點(diǎn)。材料

5、和方法：體外培養(yǎng)T H S F 細(xì)胞，分別用E R K 、P 3 8 、J N K 通路阻斷劑預(yù)處理后，T G F —Dl 刺激2 4 h ，收集細(xì)胞并檢測(cè)C T G Fm R N A 的表達(dá)。建立體內(nèi)大鼠角膜創(chuàng)傷模型，實(shí)驗(yàn)組用J N K 通路阻斷劑S P 6 0 0 1 2 5 處理。模型建立前3 0 分鐘及建立后每天采用S P 6 0 0 1 2 5 ( 5 0 uM ) 結(jié)膜下注射，對(duì)照組用生理鹽水處理。裂隙燈每天觀察臨床改變，組

6、織切片H E 染色觀察角膜組織學(xué)改變。免疫組化檢測(cè)C T G F 、磷酸化J N K ( p h o s p h o r y l a t e d J N K ，嚴(yán)J N K ) 變化，熒光定量P C R 檢測(cè)T G F —B1 及C T G Fm R N A 的表達(dá)。培養(yǎng)T H S F 細(xì)胞，S P 6 0 0 1 2 5 阻斷J N K 通路后，再用T G F —B 1刺激T H S F 細(xì)胞，2 4 h 后M T T 法檢測(cè)細(xì)胞增殖