NF-kBp65在DCD大鼠供肝移植及移植后的表達情況.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　肝臟缺血再灌注損傷是一個復(fù)雜的病理生理過程，多種機制參與其中，其主要機制與活性氧、kupffer細胞、鈣超載等密切相關(guān);近年來研究表明許多細胞因子參與了這一過程，如TNF-α、IL-1、ICAM-1、INOS等，而這些細胞因子又都受NF-kB的基因調(diào)控，目前研究表明是肝缺血再灌注損傷過程中NF-κB被激活，促使TNF-α、IL-1和INOS mRNA表達增強，導(dǎo)致肝缺血再灌注損傷。目前認為核轉(zhuǎn)錄因子kB家族大部分以

2、二聚體形式存在，活性最強的NF-kB是p65和p50蛋白質(zhì)的異源二聚體，其與多種炎癥、腫瘤以及細胞調(diào)亡的發(fā)生、發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)，能夠促進炎癥、腫瘤及凋亡相關(guān)蛋白的合成;相關(guān)實驗研究顯示，在缺血再灌注損傷中NF-kB p65被激活;而通過抑制NF-kBp65表達能夠?qū)θ毖俟嘧p傷起到保護作用。本實驗通過建立大鼠DCD原位肝移植模型，研究NF-kB p65在大鼠移植肝中的表達，探討NF-kB p65與其調(diào)控相關(guān)介質(zhì)在肝臟缺血再灌注損傷。

3、
　　實驗方法：
　　建立DCD供體大鼠原位肝移植模型。
　　將100只SPF級SD雄大鼠隨機分為假手術(shù)組（20只）、正常移植組（40只）、DCD移植組（40只）（心臟停跳20分鐘移植）。三組術(shù)前均經(jīng)陰莖背靜脈依照200U/Kg注射肝素。假手術(shù)組、正常移植組和DCD移植組均于術(shù)后1h，2h，4h，6h，12h取下腔靜脈血檢測血ALT水平，處死動物后取肝臟組織標(biāo)本，應(yīng)用RT-QPCR方法檢測NF-kBp65、TNF-a、

4、IL-1，應(yīng)用western-blot方法檢測NF-kBp65表達情況及HE染色方法評估肝臟損傷程度，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　實驗結(jié)果：
　　1、NF-kBp65mRNA轉(zhuǎn)錄在DCD肝移植大鼠中較假手術(shù)組明顯增加(P＜0.05)，且DCD肝移植組較正常肝移植組轉(zhuǎn)錄顯著增加(P＜0.05)。其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。NF-kBp65蛋白表達在DCD肝移植大鼠中較假手術(shù)組明顯增加(P＜0.05)，且DCD肝移植組較正常肝移植組轉(zhuǎn)錄顯

5、著增加(P＜0.05)。其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。細胞因子TNF-a、IL-1mRNA轉(zhuǎn)錄在DCD肝移植大鼠中較假手術(shù)組明顯增加(P＜0.05)，且DCD肝移植組較正常肝移植組轉(zhuǎn)錄顯著增加(P＜0.05)。其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義
　　2、各分組術(shù)后1h、2h、4h、6h及12h取血清，檢測ALT水平。血清ALT水平，與假手術(shù)組相比，正常移植組和DCD組大鼠血清ALT水平在移植后1h、2h、4h、6h及12h均明顯升高(P＜0.05);與

6、正常肝移植組相比，DCD組各時間點血清中ALT水平顯著升高(P＜0.05)。
　　3、各時間點肝臟的病理變化情況
　　肝移植再灌注后肝臟小葉結(jié)構(gòu)開始破壞，出現(xiàn)出血、炎性細胞浸潤、水腫、脂肪變性、細胞皺縮核分裂甚至壞死、凋亡。且隨著時間從1h增加到12h，肝臟損傷顯著增加。DCD組肝移植后肝臟損傷在各時間點較正常肝移植后明顯提前且程度更嚴重
　　實驗結(jié)論：
　　NF-kBp65、TNF-a、IL-1 mRNA在大鼠