供肝冷保存門脈再灌注制備大鼠肝移植模型.pdf

1、目的：在Kamada“二袖套法”的基礎(chǔ)上采用在供肝冷保存時(shí)經(jīng)門靜脈再灌注的方法建立穩(wěn)定的大鼠原位肝移植動(dòng)物模型，為以后進(jìn)行肝移植免疫排斥、器官保存、缺血再灌注等進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供安全、有效的模型制作方法。 方法：在Kamada“二袖套法”基礎(chǔ)上適當(dāng)改進(jìn)建立大鼠肝移植模型。將30只接受供肝移植的SD大鼠隨機(jī)分為5組(n=6)：A組假手術(shù)組，開腹后不做任何處理即關(guān)腹；B組供肝修整后冷保存期不進(jìn)行再灌注；C組供肝修整后以5ml生理鹽

2、水經(jīng)門靜脈灌注；D組供肝修整后以10ml生理鹽水經(jīng)門靜脈灌注；E組供肝修整后以15ml生理鹽水經(jīng)門靜脈灌注。然后以Kamada“二袖套法”為基礎(chǔ)并做改進(jìn)完成大鼠原位肝移植模型。觀察各組受體大鼠下列各種指標(biāo)： 1.一般情況術(shù)后蘇醒時(shí)間、受體體重變化以及精神狀態(tài)，活動(dòng)、進(jìn)食情況，皮膚黃染程度，小便顏色。 2.大鼠生存情況3各組術(shù)后1，4，7天血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血清總膽紅素(ST

3、B)和白蛋白(ALB)的變化，于術(shù)后第7天取部分肝組織行光鏡檢查，觀察肝細(xì)胞及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果： 1.一般情況B組大鼠術(shù)后蘇醒時(shí)間明顯長(zhǎng)于A組和D組(P＜0.05)。A組體重逐日增加，活動(dòng)進(jìn)食水正常，未見皮膚黃染，大小便均正常，B、C、D、E組受體大鼠上述各個(gè)方面均有不同程度改變：進(jìn)食量下降、活動(dòng)遲緩、鼠耳皮膚及小便出現(xiàn)輕度黃染，但于術(shù)后3天上述癥狀均得到改善甚至消退；B組存活三天體重下降程度高于其余各組

4、，和D組相比差異明顯(P＜0.05)，B組存活一周體重增加程度明顯低于A、D、E組(P＜0.05)。 2.大鼠生存情況：A組、C組、D組和E組中位生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于B組(P＜0.05)；但D組和E組中位生存時(shí)間無明顯差異(P＞0.05)。 3.術(shù)后大鼠肝功能情況：術(shù)后1、4、7天各組大鼠ALT均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，但D組大鼠ALT值明顯低于與B組和C組(P＜0.05)；術(shù)后1、4、7天各組大鼠AST均顯著高于對(duì)

5、照組(P＜0.05)，D組大鼠術(shù)后1、4天AST值明顯低于C組(P＜0.05)，并于術(shù)后7天相對(duì)于其它各組明顯下降(P＜0.05)；除D組外，其余各組大鼠術(shù)后1、4天總膽紅素均出現(xiàn)不同程度高于對(duì)照組，以B組最為明顯(P＜0.05)，術(shù)后7天時(shí)B組總膽紅素明顯高于其它組(P＜0.05)，D組此時(shí)顯著降低(P＜0.05)；術(shù)后1、4、7天各組大鼠ALB均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，但D組下降程度較低，其白蛋白仍明顯高于B、C、E組(P＜

6、0.05)，于術(shù)后4天開始升高，E組術(shù)后白蛋白始終處于較低水平。 4.組織病理學(xué)改變：A組術(shù)后1周可見肝竇輕度擴(kuò)張，余未見明顯異常；B組術(shù)后1周可見明顯淤血改變，并于術(shù)后3天死亡大鼠肝臟發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞大片壞死伴有微膿腫形成；C組術(shù)后1周可見肝細(xì)胞索斷裂，也可見淤血改變；D組術(shù)后1周可見匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤，術(shù)后1月可見肝細(xì)胞小片壞死，伴有淋巴細(xì)胞浸潤；E組術(shù)后1周可見肝細(xì)胞大片壞死，細(xì)胞橋消失，并可見小部分肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪空泡改變。