CVB3感染對(duì)Hela細(xì)胞凋亡及4EBP1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：用柯薩奇病毒B3(Coxsackievirus B3，CVB3)感染體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞，觀察CVB3感染對(duì)Hela細(xì)胞形態(tài)及凋亡變化的影響，以及對(duì)4EBP1表達(dá)的影響，探討細(xì)胞凋亡及4EBP1表達(dá)在CVB3感染中的意義。
　　 方法：以CVB3分別感染未饑餓及饑餓Hela細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并以膜聯(lián)蛋白V(FITC-Annexin V)聯(lián)合PI染色雙參數(shù)技術(shù)(Annexin V/PI法)定量檢測(cè)饑餓Hela細(xì)胞凋

2、亡變化，RT-PCR法及Real-time PCR法檢測(cè)未饑餓及饑餓Hela細(xì)胞中4EBP1的表達(dá)，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：⑴Hela細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：CVB3感染Hela細(xì)胞后，可引起細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect，CPE)，光鏡下細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞變圓變暗，漂浮成空泡狀或呈葡萄串樣聚集。⑵Hela細(xì)胞的凋亡變化：CVB3感染Hela細(xì)

3、胞后，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡變化，病毒組各時(shí)間點(diǎn)Hela細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，且在一定時(shí)間段內(nèi)凋亡程度隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加。⑶RT-PCR及Real-time PCR檢測(cè)未饑餓Hela細(xì)胞4EBP1表達(dá)：對(duì)照組及病毒組Hela細(xì)胞中均有4EBP1表達(dá)，病毒組與對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)比較，4EBP1表達(dá)減少(P<0.05)。且隨病毒感染時(shí)間延長(zhǎng)，4EBP1表達(dá)下降(P<0.05)。⑷RT-PCR及Real-time PCR檢測(cè)饑餓后的Hel

4、a細(xì)胞4EBP1表達(dá)：對(duì)照組及病毒組Hela細(xì)胞中均有4EBP1表達(dá)，病毒組與對(duì)照組比較4EBP1表達(dá)降低(P<0.05)，且隨病毒感染時(shí)間延長(zhǎng)，4EBP1表達(dá)下降(P<0.05)。⑸饑餓組與非饑餓組比較，非饑餓組4EBP1表達(dá)低于饑餓組(P<0.05)，提示營(yíng)養(yǎng)因素可影響4EBP1的表達(dá)。
　　 結(jié)論：①CVB3感染Hela細(xì)胞后可使Hela細(xì)胞發(fā)生凋亡，并隨著病毒感染時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡增多，提示細(xì)胞凋亡參與CVB3的致病機(jī)