CVB3感染小鼠心肌細胞及心臟成纖維細胞后病毒滴度及PD-L1與IFN-β的表達情況.pdf

1、目的:病毒性心肌炎屬于感染性心肌疾病，可由多種病毒感染引發(fā)，其中腸道病毒尤其是柯薩奇病毒B3(Coxsackie virus B3，CVB3)是引起病毒性心肌炎最常見的原因。CVB3引發(fā)的病毒性心肌炎主要可引起病毒直接損傷與病毒感染后引起機體免疫炎癥性損傷。病毒性心肌炎甚至可發(fā)展為擴張性心肌病。目前治療病毒性心肌炎，臨床缺乏有效的特異的治療方法。因此對CVB3感染引起病毒性心肌炎的過程及干預辦法的研究都勢在必行。而心臟中有50％的細胞為

2、成纖維細胞，心臟中最有功能的細胞為心肌細胞，因而有必要對CVB3感染機體后CVB3在心肌細胞及心臟成纖維細胞內的變化情況以及這兩種細胞對CVB3刺激后的反應情況進行深入研究，為研究病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展過程及有效治療提供依據(jù)。
　　方法:(1)C57BL/6小鼠心肌細胞及心臟成纖維細胞體外培養(yǎng):無菌取C57BL/6新生小鼠心臟，剪碎，經胰酶及Ⅱ型膠原酶消化后收集細胞至6孔板中，1.5小時差速貼壁， CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。(2)小鼠心

3、肌細胞及心臟成纖維細胞感染柯薩奇病毒后培養(yǎng)并觀察細胞病變，分別取第1天，第2天，第3天，第4天，第5天，第7天，第9天的細胞上清液。(3)收集到的細胞上清液分別用Hela細胞測定病毒滴度。(4) Trizol提取細胞總RNA:心肌細胞感染柯薩奇病毒后，分別在1天、3天、5天、7天、9天后提取細胞總RNA;心臟成纖維細胞感染柯薩奇病毒后，分別在3小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時后提取細胞總RNA，未處理組作為正常細胞對

4、照組，進行Real Time PCR。
　　結果:(1)小鼠心肌細胞及心臟成纖維細胞可進行體外培養(yǎng)且生長良好。(2)小鼠心肌細胞感染柯薩奇病毒后部分細胞出現(xiàn)細胞病變，取不同時間點的細胞上清液，感染Hela細胞，測定到病毒滴度-lgCCID50前4天逐漸下降，第5天、7天、9天水平為0;小鼠心臟成纖維細胞感染柯薩奇病毒后少量細胞出現(xiàn)細胞病變，取不同時間點的細胞上清液，感染Hela細胞，測定到病毒滴度-lgCCID50前2天逐漸下降，

5、第3天至第9天水平為0。(3)用柯薩奇病毒感染心肌細胞后，Real Time PCR的結果顯示PD-L1的mRNA表達在1天、3天持續(xù)升高，在3天達到高峰，5天略有下降，7天、9天降至正常水平以下;IFN-β的mRNA表達在1天略有下降，在3天達到第一個高峰，5天、7天降至正常水平，9天達到最高峰。用柯薩奇病毒感染心臟成纖維細胞后，Real Time PCR的結果顯示PD-L1的mRNA表達在3小時略有下降，6小時回到正常水平，12小時

6、、24小時逐漸升高，48小時、72小時降至正常水平;IFN-β的mRNA表達在3小時略有升高，6小時、12小時逐漸降至正常水平，24小時、48小時逐漸升高，72小時達到最高峰。
　　結論:(1) CVB3感染早期主要破壞部分小鼠心肌細胞結構，誘導細胞凋亡，對心臟成纖維細胞損傷不明顯，在體外培養(yǎng)小鼠心肌細胞及心臟成纖維細胞不增殖。(2)正常小鼠心肌細胞及心臟成纖維細胞構成性表達PD-L1和IFN-β mRNA。(3) CVB3感染小