前列腺癌中RANK-RANKL-OPG的表達(dá)與前列腺癌侵襲及骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系.pdf

1、目的：前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤中最重要的一種。前列腺癌也是最易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤，超過80％的前列腺癌患者會發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，RANK/RANKL/OPG系統(tǒng)最初在骨組織中被發(fā)現(xiàn)，且與骨組織吸收、調(diào)節(jié)有關(guān)：RANKL與RANK結(jié)合，通過一系列的級聯(lián)反應(yīng)和信號傳導(dǎo)，可促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化、活化與存活。OPG是RANKL的可溶性誘騙受體，OPG通過與RANKL結(jié)合從而阻止RANKL與RANK的結(jié)合，阻止破骨細(xì)胞分化、活化。其中RANKL以跨

2、膜蛋白及可溶蛋白兩種形式存在，RANK只以跨膜蛋白形式存在，OPG只以可溶蛋白形式存在。近幾年有報道RANK/RANKL/OPG與一些腫瘤包括前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。此外有研究表明RANKL/RANK信號途徑還具有趨化作用。而RANK/RANKL/0PG與前列腺癌發(fā)生侵襲及骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系至今未見全面的報道。
　　 方法：
　　 1.選取前列痛患者的組織標(biāo)本70例，前列腺增生組織20例，用免疫組化法測定前列腺癌組織中RAN

3、K、OPG、RANKL的表達(dá)，分析組織中RANK、RANKL、OPG的表達(dá)水平與前列腺癌臨床病理特征及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　 2.對其中40例前列腺癌、20例前列腺增生病人血清、組織中OPG、sRANKL的表達(dá)水平進(jìn)行了ELISA檢測。分析血清及組織中sRANKL、OPG的表達(dá)水平與臨床病理特征及轉(zhuǎn)移的關(guān)系；血清與組織中sRANKL、OPG表達(dá)的相關(guān)性。
　　 3.選用三種人類前列腺癌細(xì)胞株：PC3、DU145、LNCaP及

4、人類正常前列腺細(xì)胞株RWPE2，用Western、RT-PCR法檢測了其中RANK的蛋白及mRNA表達(dá)情況。
　　 4.在Transwell侵襲試驗做細(xì)胞因子sRANKL對前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3、DU145、LNCaP，正常前列腺細(xì)胞株RWPE2侵襲性影響，觀察OPG對其侵襲能力的影響。
　　 5.RANK的RNA干擾實驗進(jìn)一步明確RANK/RANKL途徑對細(xì)胞侵襲性的影響：特異性靶向RANK的小干擾RNA，將其轉(zhuǎn)染至前列

5、腺癌細(xì)胞系中，用Transwell侵襲試驗觀察RANK基因被沉默對前列腺癌細(xì)胞侵襲性的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫組化染色顯示：RANK、RANKL、OPG蛋白在良性前列腺增生中不表達(dá)、或少量微弱表達(dá)，在前列腺癌組織中高表達(dá)。在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的前列腺癌、高水平PSA、高表達(dá)AR的前列腺癌中，RANK、RANKL、OPG的表達(dá)水平增高(P＜0.05)。而在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移時RANK、RANKL、OPG的表達(dá)水平顯著增

6、高(P＜0.01)。
　　 2.ELISA結(jié)果顯示；組織中sRANKL、OPG在前列腺癌中的表達(dá)高于前列腺增生組織(P＜0.05)。前列腺癌組織中sRANKL、OPG的表達(dá)在發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的、高水平PSA、高表達(dá)AR的前列腺癌中，表達(dá)水平增高(P＜0.05)。血清中OPG在前列腺癌中的表達(dá)高于前列腺增生組織(P＜0.05)。在發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的、高水平PSA、高表達(dá)AR的前列腺癌中，血清OPG水平增高(P＜0.05)；而血清sRANK的表

7、達(dá)在前列腺癌及前列腺增生中無明顯差異，sPANKL在前列腺癌的表達(dá)與年齡、Gleason評分、腫瘤分期、PSA水平、AR的表達(dá)情況均無關(guān)。血清OPG與組織中OPG含量存在正相關(guān).回歸方程為：y=0.9588x+0.4512(R2=0.7504，P＜0.05)。血清RANKL水平和組織RANKL水平未見明顯相關(guān)性。
　　 3.用Western blot、RT-PCR檢測前列腺癌細(xì)胞系PC3、DU145、LNCaP及正常前列腺細(xì)胞系

8、RWPE2中RANK蛋白及mRNA表達(dá)情況的表達(dá)：在前列腺癌細(xì)胞系中RANK蛋白及mRNA水平均顯著高于正常前列腺細(xì)胞系中表達(dá)。
　　 4.Transwell侵襲實驗觀察RANKL、OPG對前列腺癌細(xì)胞侵襲性的影響：2.5μg/mlRANKL可顯著提高RANK高表達(dá)的PC-3、LnCap、DU145細(xì)胞系的侵襲能力(P＜0.05)，對RANK低表達(dá)的RWPE2細(xì)胞系的侵襲能力無影響。2.5μg/mlRANKL+10μg/mlOP

9、G可抑制由RANKL提高的侵襲能力(P＜0.05)。
　　 5.特異性靶向RANK的小干擾RNA，RANK基因被沉默后，用transwell侵襲實驗進(jìn)一步明確RANK/RANKL信號途徑對前列腺癌細(xì)胞侵襲性的影響：在三種前列腺癌細(xì)胞株中，SiRNA-2從10pg/ml濃度就可以顯現(xiàn)出抑制侵襲效果；100pg/ml濃度可以顯示出顯著的抑制侵襲效果(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.前列腺癌組織中RANKL、