Braf突變結(jié)腸上皮細胞中雌激素通過PPARγ對凋亡的影響研究.pdf

1、目的：
　　探究過表達BrafV600E的結(jié)腸上皮細胞中，雌激素對增殖、凋亡的影響及其機制。
　　方法：
　　首先將 BrafV600E和空載體的兩種質(zhì)粒包裝成慢病毒，然后感染結(jié)腸黏膜上皮細胞NCM460。經(jīng)嘌呤霉素篩選出陽性的過表達細胞（NCM460-BrafV600E和NCM460-Vector），再利用western blot方法檢測BrafV600E及其下游的p-mek蛋白表達情況以確保建立了NCM460-Br

2、afV600E和 NCM460-Vector兩種穩(wěn)定表達的細胞株。在有或無雌激素存在的條件下，通過生長曲線和 MTT方法檢測兩種細胞的增殖情況；流式細胞術(shù)檢測雌激素對兩種細胞凋亡的影響；轉(zhuǎn)染si PPARγ至NCM460-BrafV600E細胞，采用qPCR及western blot檢測PPARγ的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的沉默的影響，進而通過流式細胞儀和western blot檢測NCM460-BrafV600E細胞的凋亡數(shù)量及凋亡相關(guān)蛋白的表

3、達情況。
　　結(jié)果：
　　雌激素可以抑制 NCM460-BrafV600E細胞的增殖，通過增加 PPARγ的表達，進而增加NCM460-BrafV600E細胞的凋亡數(shù)量（P<0.05）。轉(zhuǎn)染si PPARγ之后，NCM460-BrafV600E細胞凋亡的數(shù)量明顯減少（P<0.05），且促凋亡蛋白（Bax，Bak，cleaved-caspase3）表達降低，同時抗凋亡蛋白（Bcl-2）表達增高。
　　結(jié)論：
　　B