版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景和目的:
卵巢癌是病死率最高的婦科惡性腫瘤,具有高度侵襲性,且發(fā)病隱匿,超過70%的患者就診時已為晚期,預后差。腫瘤細胞減滅術輔以鉑類和紫杉醇為主的化療是目前卵巢癌的一線治療方案,但是化療耐藥及腫瘤復發(fā)使傳統(tǒng)治療面臨著嚴峻挑戰(zhàn)[1]。因此,卵巢癌的分子靶向治療是近年來國內(nèi)外研究的熱點[2]。目前分子靶向制劑大多是與腫瘤異常靶分子結(jié)合的單克隆抗體或小分子蛋白激酶抑制劑,從而調(diào)節(jié)細胞生長、抑制血管生成等,特異性高且毒性小。
2、r> PARP-1是存在于多數(shù)真核細胞內(nèi)、具有多聚腺苷酸二磷酸核糖基(PAR)催化活性的蛋白酶,在DNA損傷修復、基因轉(zhuǎn)錄、細胞周期、染色體功能、基因組穩(wěn)定和細胞死亡等方面均發(fā)揮重要作用[3]。本課題前期研究表明,PARP-1在卵巢癌中的表達明顯上調(diào),應用PARP-1抑制劑可增強卵巢癌耐藥細胞對化療藥物的敏感性[4]。Pyriochou等[5]研究證實,PARP-1抑制劑PJ34可抑制雞胚尿囊膜實驗(CAM)的血管生成,有關PARP-
3、1是否對卵巢癌的血管生成產(chǎn)生影響的報道較少。
本研究擬采用免疫組織化學方法檢測PARP-1、VEGF-A、MVD在上皮性卵巢癌中的表達,分析PARP-1與VEGF-A、MVD表達的相關性,并通過RNA干擾沉默SKOV3細胞的PARP-1基因,檢測轉(zhuǎn)染后細胞VEGF-A的表達變化以及對臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)體外成管能力的影響,探討PARP-1對卵巢癌血管生成、增殖的影響,從而為PARP-1的分子靶向治療提供理論依據(jù)。
4、> 方法:
1.采用免疫組織化學方法檢測60例上皮性卵巢癌原發(fā)灶中PARP-1、VEGF-A、MVD的表達及30例正常卵巢對照組織中PARP-1的表達,根據(jù)組化結(jié)果判定標準將卵巢癌組織分為PARP-1陽性組、PARP-1陰性組。
2.RNA干擾沉默卵巢癌SKOV3細胞的PARP-1基因,將細胞分為轉(zhuǎn)染陰性對照siRNA組(NC-siRNA組)、轉(zhuǎn)染PARP-1siRNA組(PARP1-siRNA組)。
3
5、.體外成管實驗觀察沉默PARP-1對臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)體外成管能力的影響。
4.MTT法檢測NC-siRNA組、PARP1-siRNA組細胞的增殖活性。
5.實時定量PCR(qRT-RCR)檢測PARP-1及VEGF-AmRNA表達,蛋白免疫印跡法(Westernblot)檢測細胞內(nèi)PARP-1及VEGF-A蛋白表達。ELISA法檢測細胞上清中VEGF-A的含量。
結(jié)果:
1.PARP-
6、1、VEGF-A、MVD在上皮性卵巢癌中的表達PARP-1陽性表達主要定位于細胞核,卵巢癌組織中PARP-1陽性率為73.3%(44/60),正常卵巢對照組織中PARP-1陽性率為26.7%(8/30),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。VEGF-A陽性表達主要定位于細胞漿,在所有檢測的卵巢癌標本中全部表達,評分位于1-6分,均值為(3.05±1.61)分。CD34標記的MVD顯示,所有卵巢癌標本的MVD均值為19.14±6.24。
7、r> 2.PARP-1與卵巢癌臨床病理特征之間的關系PARP-1在腫塊<2cm組的陽性率顯著低于腫塊>2cm組(P<0.05),在高中分化組的陽性率顯著低于低分化組(P<0.05),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05),而在不同臨床分期組間的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
3.上皮性卵巢癌中PARP-1與VEGF-A、MVD的相關性VEGF-A評分均值PARP-1陽性組(3.80±1.69)高
8、于PARP-1陰性組(2.30±1.16),兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。MVD均值PARP-1陽性組(23.86±4.67)高于PARP-1陰性組(14.43±3.26),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
4.轉(zhuǎn)染效率檢測慢病毒載體中攜帶綠色熒光蛋白GFP,在倒置熒光顯微鏡下,成功轉(zhuǎn)染細胞發(fā)綠色熒光,轉(zhuǎn)染12h后可見熒光表達,72h熒光強度最高,NC-siRNA組、PARP1-siRNA組的轉(zhuǎn)染效率分別為89%
9、、86%。
5.RNA干擾對HUVEC體外成管的影響提取轉(zhuǎn)染后兩組細胞的上清液分別培養(yǎng)HUVEC,結(jié)果顯示,體外成管數(shù)目NC-siRNA組(14.67±1.21)高于PARP1-siRNA組(8.83±1.47),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
6.RNA干擾對細胞增殖的影響MTT檢測結(jié)果表明,PARP1-siRNA組細胞增殖活性減弱,在48h、72h、96h,與NC-siRNA組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.0
10、5)。
7.RNA干擾對PARP-1mRNA及蛋白的抑制作用與NC-siRNA組相比,PARP1-siRNA組PARP-1mRNA的相對表達量明顯下降(P<0.05),以actin為內(nèi)參照,NC-siRNA組、PARP1-siRNA組PARP-1蛋白表達量分別為0.93±0.22、0.38±0.05,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。表明成功構(gòu)建了PARP-1基因沉默的細胞模型。
8.RNA干擾對VEGF-AmRNA
11、及蛋白表達的影響PARP-1基因被沉默后,PARP1-siRNA組VEGF-AmRNA水平較NC-siRNA組明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Westernblot結(jié)果顯示,NC-siRNA組、PARP1-siRNA組VEGF-A蛋白表達量分別為:0.90±0.18、0.41±0.08,PARP1-siRNA組較NC-siRNA組表達下降(P<0.05)。表明siRNA沉默PARP-1基因后,VEGF-A在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均下
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 舒林酸對卵巢癌血管生成的影響及機制探討.pdf
- PARP抑制劑對卵巢癌C13-細胞增殖、侵襲的影響及其機制探討.pdf
- RNA干擾抑制PARP-1基因表達對卵巢癌細胞增殖及耐藥性的影響.pdf
- PARP-1和EMT在卵巢癌中的生物學功能及意義.pdf
- 卵巢癌血管生成擬態(tài)及其相關分子機制的初步研究.pdf
- PARP-1抑制劑對卵巢癌耐藥細胞C13-生長活性及耐藥性的影響.pdf
- 抗HER-2抗體對人卵巢癌血管生成的影響.pdf
- 低劑量節(jié)拍化療對卵巢癌細胞SKOV3血管生成擬態(tài)的影響及其機制的探討.pdf
- HMGB1在卵巢癌血管生成中的作用研究.pdf
- 人卵巢癌雞胚尿囊膜血管生成模型的建立及其生成機制的研究.pdf
- ADFMChR對人卵巢癌裸鼠移植瘤生長及血管生成的影響.pdf
- 低劑量節(jié)拍化療對荷人卵巢癌裸鼠移植瘤血管生成擬態(tài)的影響及可能機制.pdf
- 靶向造影劑對卵巢癌血管生成擬態(tài)的超聲評價.pdf
- 卵巢癌SPOP促凋亡作用及其機制的初步探討.pdf
- 苦參堿對人卵巢癌細胞的增殖影響及其機制.pdf
- 雌激素受體亞型對卵巢癌增殖和侵襲的影響.pdf
- γ-干擾素抗卵巢癌血管生成的體外研究.pdf
- THY1基因在卵巢癌中的表達及其對卵巢癌細胞生長的影響.pdf
- 腎上腺髓質(zhì)素對上皮性卵巢癌血管生成的作用及機制的研究.pdf
- EGFR與卵巢癌血管生成及化療耐藥關系的研究.pdf
評論
0/150
提交評論