EGF-FOXM1在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用及作用機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：卵巢癌的發(fā)生伴隨著各種基因通路的相互作用，研究這些基因的功能有助于癌癥的基因靶向治療。EGF、FOXM1基因均提示可能參與卵巢癌的發(fā)生與惡性進(jìn)展，本課題通過臨床標(biāo)本及體外實(shí)驗(yàn)研究EGF/FOXM1在卵巢癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移中的作用及作用機(jī)制。
　　方法：采用免疫組化SP法對(duì)臨床上收集的卵巢癌組織標(biāo)本和正常的卵巢組織標(biāo)本檢測(cè)FOXM1的表達(dá)情況；利用Western blot技術(shù)分析人卵巢癌細(xì)胞HO8910PM、OVCAR3、S

2、KOV3等細(xì)胞中 FOXM1的表達(dá)情況；不同濃度EGF作用于SKOV3細(xì)胞后用Western blot法檢測(cè)FOXM1的表達(dá)情況；cck8法檢測(cè)不同濃度EGF對(duì)SKOV3細(xì)胞的增值影響；Transwell小室法檢測(cè)不同濃度EGF對(duì)SKOV3細(xì)胞的遷移、侵襲影響；設(shè)計(jì)合成三種靶向人 FOXM1基因的siRNA表達(dá)序列，應(yīng)用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000共轉(zhuǎn)染至SKOV3細(xì)胞作用24h后提取總蛋白，應(yīng)用Western blot

3、技術(shù)分析轉(zhuǎn)染后 SKOV3細(xì)胞 FOXM1蛋白表達(dá)量，選取敲除 FOXM1效能最佳的siRNA序列；cck8法檢測(cè)敲除FOXM1后添加EGF與否對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：1、卵巢癌組織中 FOXM1表達(dá)顯著高于正常卵巢組織，F(xiàn)OXM1在卵巢癌 OVCAR3細(xì)胞、SKOV3細(xì)胞、HO8910細(xì)胞中均有明顯表達(dá)，其中 SKOV3細(xì)胞表達(dá)量高于其他兩種細(xì)胞；2、SKOV3細(xì)胞經(jīng)不同濃度【濃度（ng/ml）=0、5、10、2

4、5、50、100】EGF處理后行Western blot法檢測(cè)提示EGF濃度為10ng/ml時(shí)FOXM1的表達(dá)量最高（P<0.05）；3、SKOV3細(xì)胞經(jīng)不同濃度【濃度（ng/ml）=0、5、10、25、50、100】EGF處理后行cck8檢測(cè)提示10ng/ml濃度的細(xì)胞吸光度最高（P<0.01）；濃度為10ng/ml的EGF作用于SKOV3細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組，不加EGF作為對(duì)照，Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)24h后電鏡拍照提示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞

5、遷移率大于對(duì)照組（P=0.002），侵襲實(shí)驗(yàn)24h后電鏡拍照提示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移率大于對(duì)照組（P=0.015）；4、三種靶向FOXM1的siRNA感染 SKOV3細(xì)胞后Western blot證實(shí)siRNA-FOXM1-801的沉默效果最好；cck8法檢測(cè)siRNA-FOXM1-801沉默F(xiàn)OXM1后能顯著抑制SKOV3細(xì)胞增殖（P=0.005）；cck8法檢測(cè)FOXM1–siRNA-801沉默F(xiàn)OXM1后吸光度提示對(duì)照組（未加EGF）和

6、實(shí)驗(yàn)組（EGF=10ng/ml）統(tǒng)計(jì)結(jié)果無明顯差異（P=0.882）。
　　結(jié)論：FOXM1基因在卵巢癌組織中過表達(dá)，三株卵巢癌細(xì)胞株中均有 FOXM1的過度表達(dá)，以SKOV3細(xì)胞的表達(dá)量最高；EGF濃度為10ng/ml時(shí)促進(jìn) SKOV3細(xì)胞中 FOXM1的表達(dá)作用最明顯以及增強(qiáng) SKOV3細(xì)胞的增殖、侵襲能力，敲除FOXM1基因后EGF失去對(duì)細(xì)胞增殖的影響，從而證明EGF可能通過EGF/FOXM1通路對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等有