豬流行性腹瀉病毒SHpd-2012株單克隆抗體的制備及S蛋白抗原表位鑒定.pdf

1、豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的，一種可致仔豬嚴(yán)重腹瀉的高度接觸性腸道傳染病。近年來由于PEDV毒株的變異，原有的疫苗防控效果受到影響，對(duì)該病的防控提出了更高的要求。但是目前對(duì)新流行毒株的致病機(jī)理尚不明確，缺乏高效特異的診斷方法，迫切需要對(duì)其開展基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。
　　本研究通過超速離心的方法純化PEDV全病毒后免疫小鼠，制備了13株陽性雜交瘤細(xì)胞株：

2、F1-D6、F21-D5、F21-F3、F21-F5、F31-D3、F31-D6、F31-F3、F31-F5、F31-G3、F31-G4、F42-C6、F51-F4、F51-G4，通過IFA、ELISA以及Western blot檢測(cè)，確定其中能特異性識(shí)別PEDV N蛋白的細(xì)胞株有3株：F31-D3、F31-F3、F1-D6，能與PEDV S蛋白特異性結(jié)合的細(xì)胞株有1株，為F42-C6。
　　PEDV S蛋白是PEDV的一個(gè)重要結(jié)

3、構(gòu)蛋白，它既含有介導(dǎo)病毒侵入宿主細(xì)胞的受體結(jié)合域，又擁有介導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生病毒中和抗體的抗原表位。因此，選取單抗F42-C6，鑒定其識(shí)別的抗原表位。以毒株SHpd/2012為模板構(gòu)建并表達(dá)了相互重疊的融合蛋白S11、S12、S13、S21、S22，結(jié)果顯示F42-C6能特異性識(shí)別截短蛋白S13。對(duì)S13融合蛋白進(jìn)行進(jìn)一步截短表達(dá)以精確定位其抗原表位，結(jié)果表明：F42-C6識(shí)別PEDV S蛋白的抗原表位的最小功能域?yàn)椋?06AYVDDD711。