骨痹合劑干預C518大鼠膝關節(jié)退變軟骨細胞的機制研究.pdf

1、目的：膝關節(jié)骨性關節(jié)炎(KOA)是中老年人最常見的退行性骨關節(jié)疾病。其中，中醫(yī)藥在治療KOA時有獨特的優(yōu)勢。因此，我們開展了使用中藥復方制劑—骨痹合劑干預C518大鼠膝關節(jié)退變軟骨細胞的機制研究，這不僅豐富和發(fā)展了中醫(yī)藥從痹論治KOA產生療效的可能生物學基礎和現代科學內涵，而且還建立了從痹論治KOA的現代生物學研究思路和方法學平臺。
　　 方法：首先，探討了近10年中醫(yī)藥治療KOA的用藥規(guī)律。同時，選取人膝關節(jié)正常、退變軟骨組織

2、和退變軟骨細胞，以及C518大鼠膝關節(jié)正常和退變軟骨細胞，用多種染色手段對其進行形態(tài)特征觀察。最后，用MTT法檢測骨痹合劑對C518大鼠膝關節(jié)退變軟骨細胞增殖的影響，并對骨痹合劑干預后的C518大鼠膝關節(jié)退變軟骨細胞進行COL-Ⅱ、MMP-13免疫組化染色，探討其作用機制。
　　 結果：⑴骨痹合劑基本符合近10年中醫(yī)藥治療KOA的用藥規(guī)律。⑵在人膝關節(jié)退變軟骨細胞中，可見原代細胞形態(tài)呈長梭形和多角形，細胞核變形、萎縮，傳代細胞更

3、甚。同時，人膝關節(jié)退變軟骨細胞中COL-Ⅰ和COL-Ⅱ免疫熒光均為低表達，COL-X、bFGF、MMP-13免疫熒光均為高表達。人膝關節(jié)退變軟骨組織病理變化可見軟骨變薄，表面有侵蝕，深層細胞有肥大樣和纖維樣改變。⑶C518大鼠膝關節(jié)退變軟骨細胞的病理變化可見細胞形態(tài)呈長梭形和多角形，隨著退變加劇，增殖速度放緩、數量減少，同時出現衰老、死亡。⑷在藥物對細胞增殖的影響上，在同一時間點的不同濃度中，各組之間都有顯著性差異(P＜0.01)。在同

4、一時間點的骨痹合劑組、氨糖美辛組中，各濃度之間都有顯著性差異(P＜0.01)。在生理鹽水組中，各濃度之間都無顯著性差異(P＞0.05)。在COL-Ⅱ、MMP-13表達水平上，各組之間都有顯著性差異(P＜0.01)。
　　 結論：①骨痹合劑基本符合中醫(yī)藥治療KOA的理論基礎。②人膝關節(jié)軟骨細胞在發(fā)生退變時COL-Ⅰ和COL-Ⅱ會減少，退變的軟骨細胞主要呈肥大樣變和纖維樣變，并伴有MMP-13的釋放。③骨痹合劑對C518大鼠膝關節(jié)退