浦東地區(qū)豬關節(jié)病重要病原體檢測及其毒力基因分析.pdf

1、豬關節(jié)病通常指導致豬運動功能障礙的四肢活動性關節(jié)疾病，是在生物學環(huán)境和力學等因素的共同作用下，關節(jié)發(fā)生的功能和結構的一種退行性改變。病豬臨床表現為一個或多個關節(jié)腫脹、疼痛、運動障礙，部分發(fā)病豬伴有發(fā)熱等全身癥狀。研究表明，引起該病的病原主要為豬鏈球菌（Streptococcus suis，S.suis）、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）和丹毒絲菌（Erysipelothrix rhusiopathiae

2、E.rhusiopathiae，ER）等。該病導致仔豬生長性能降低、飼料轉化率降低，種豬繁殖性能降低，不但影響豬場正常生產，而且增加了養(yǎng)殖成本，直接導致較高的死淘率，嚴重困擾著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。
　　對浦東地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)豬場的豬關節(jié)病發(fā)病原因進行調查，并以調查結果為主要依據進行權重分析，病原因素在仔豬和種豬關節(jié)病致病因素中的權重值分別為0.6140和0.4611，是引起豬關節(jié)病的主要因素。對仔豬關節(jié)病發(fā)病情況分析顯示，10～4月份為關節(jié)

3、病發(fā)病高峰，30～60日齡仔豬發(fā)病率高。后備母豬和種豬關節(jié)病發(fā)病季節(jié)性不明顯，其致病因素也更多元化。對豬關節(jié)病病原分離鑒定顯示，引起本地區(qū)豬關節(jié)病的病原菌包括鏈球菌（Streptococcus）、丹毒絲菌、副豬嗜血桿菌和葡萄球菌(Staphylococcus)。
　　為了同時檢測引起豬關節(jié)病的豬鏈球菌2型(Streptococcus suis type2，S.suis2)、HPS和丹毒絲菌，分別設計針對豬鏈球菌2型的Cps2J基因

4、，副豬嗜血桿菌的16s rRNA基因和丹毒絲菌的16s rRNA基因，設計3對特異性引物，試驗建立了同時檢測以上三種病原的多重PCR方法，并對反應條件進行優(yōu)化，對多重PCR方法的特異性和靈敏度進行了測試，采用該方法對采自豬關節(jié)病的病料進行檢測，從72份豬關節(jié)液樣品中檢出2株S.suis2、1株HPS和2株丹毒絲菌，檢測結果與單個PCR結果一致，試驗結果表明，建立的多重PCR方法敏感、特異、快速，可用于豬關節(jié)病重要病原體的檢測。
　

5、　對從豬關節(jié)病病料分離到的2株S.suis2進行毒力基因檢測，結果顯示毒力基因分布為gdh+/cps2J+/mrp+/epf+/sly+/orf2+/gapdh+,對毒力基因進行序列分析，Cps2J、MRP基因未檢出變異，提示其高度保守，orf2、GDH、GAPDH基因存在堿基點突變，但突變對其編碼的氨基酸種類無影響，與國內外參考菌株的同源性較高。對分離到的2株丹毒絲菌進行毒力基因檢測，所檢測毒力基因在2株菌內均有分布為Cps-A+/C