超聲微泡造影劑聯(lián)合Survivin反義寡核苷酸對CHG-5細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、第一部分超聲微泡造影劑聯(lián)合survivin反義寡核苷酸對CHG-5細(xì)胞survivin蛋白表達(dá)的影響 目的：探討超聲微泡造影劑(Ultrasound microbubble，UM)聯(lián)合survivin反義寡核苷酸(ASODN)對人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系CHG-5 survivinmRNA及蛋白表達(dá)的抑制作用。 方法：針對survivin基因序列設(shè)計合成survivin反義寡核苷酸，將實驗分為五組。A組：Survivin反義寡核苷酸

2、并超聲微泡造影劑聯(lián)合超聲(Ultrasound，U)照射(ASODN+UN+U)；B組：Survivin反義寡核苷酸并脂質(zhì)體(lipofectaminTM2000)轉(zhuǎn)染聯(lián)合超聲照射(ASODN+lipo+U)；C組：Survivin反義寡核苷酸并脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(ASODN+lipo)；D組：Survivin反義寡核苷酸并超聲微泡造影劑轉(zhuǎn)染(ASODN+UM)；E組：空白對照組(Control)。利用RT-PCR檢測survivinmRNA表

3、達(dá)的變化，利用免疫細(xì)胞化學(xué)、激光共聚焦及Western blotting檢測survivin蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示：A組survivin mRNA的抑制率為67.76％，B組和C組分別為48.70％和44.03％，A組明顯高于B組和C組(P＜0.05)，三者與空白對照組比較差異均具有顯著性(P＜0.05)。D組抑制率為3.84％，與空白對照組比較差異不具有顯著性(P＞0.05)。免疫細(xì)胞化學(xué)、激光共聚焦及W

4、estern blotting檢測各組細(xì)胞survivin蛋白的表達(dá)，Survivin反義寡核苷酸經(jīng)超聲微泡造影劑聯(lián)合超聲照射轉(zhuǎn)染以及經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后，survivin蛋白的表達(dá)均下調(diào)，以A組下調(diào)最明顯(P＜0.05)，三者與空白對照組比較差異均具有顯著性(P＜0.05)。D組與空白對照組比較差異不具有顯著性(P＞0.05)。這與survivin mRNA的表達(dá)變化一致。 結(jié)論：Survivin反義寡核苷酸序列較特異，轉(zhuǎn)染后能夠降

5、低survivinmRNA以及survivin蛋白的表達(dá)，但以survivin ASODN并超聲微泡造影劑聯(lián)合超聲照射組降低最明顯，超聲微泡造影劑介導(dǎo)的survivin反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染是一種無創(chuàng)、新型、高效的基因轉(zhuǎn)染方法。 第二部分超聲微泡造影劑聯(lián)合survivin反義寡核苷酸對CHG-5增殖和凋亡的影響 目的：探討超聲微泡造影劑聯(lián)合survivin反義寡核苷酸對人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株CHG-5增殖和凋亡的影響。 方法：

6、針對survivin基因序列設(shè)計合成survivin反義寡核苷酸，將實驗分為五組。A組：Survivin反義寡核苷酸(ASODN)并超聲微泡造影劑聯(lián)合超聲照射(ASODN+UM+U)；B組：Survivin反義寡核苷酸并脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染聯(lián)合超聲照射(ASODN+lipo+U)；C組：Survivin反義寡核苷酸并脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(ASODN+lipo)；D組：Survivin反義寡核苷酸并超聲微泡造影劑轉(zhuǎn)染(ASODN+UM)；E組：空白對照組(C

7、ontrol)。利用MTT法檢測細(xì)胞增殖的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率的變化。 結(jié)果：(1)在同一實驗組，隨著時間的增加，24h，48h，72h各組細(xì)胞生長抑制率均表現(xiàn)出遞增的趨勢，以72h的抑制率最大。在同一時間點，B組和C組比較細(xì)胞增殖抑制率無顯著性差異(P＞0.05)，D組與空白對照組比較，差異沒有顯著性意義，而A組與其余各組比較，差異均具有顯著性意義(P＜0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果，A組細(xì)胞凋亡率為(54