螺旋神經(jīng)元損傷機(jī)制及治療方法的研究.pdf

1、神經(jīng)性耳聾是人類最常見的疾病之一。長(zhǎng)久以來，研究者不斷的探求其發(fā)病機(jī)理、治療方法。在諸多病因中，主要的病變部位在耳蝸毛細(xì)胞和初級(jí)傳入的螺旋神經(jīng)元（SGN）。由于哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞和SGN損傷后難以再生，那么，如何修復(fù)損傷的SGN，如何提高SGN在損傷后微環(huán)境里的存活率，如何增強(qiáng)SGN在復(fù)雜的疾病狀態(tài)下自我修復(fù)功能，是耳聾機(jī)制研究的主要方向之一。本研究致力于研究SGN損傷后給予干細(xì)胞、H2治療，以及通過研究SGN發(fā)育、分化、成熟過程中mi

2、croRNA表達(dá)，探討基因調(diào)控水平下SGN可能的修復(fù)機(jī)制。
　　本研究中，成功的采用毒毛旋花子甙制造了神經(jīng)性耳聾的動(dòng)物模型。通過藥物的不同濃度，動(dòng)物的ABR聽力閾值有不同程度的改變，兩者呈正相關(guān)。但是，DPOAE則沒有明顯改變。試驗(yàn)中繼以免疫組織化學(xué)、透射電鏡、掃描電鏡、體外細(xì)胞培養(yǎng)等方法，觀察毒毛旋花子甙對(duì)SGN的損傷。為下一步研究神經(jīng)性耳聾的后續(xù)工作打下良好的基礎(chǔ)。
　　將動(dòng)物的聽力部分損傷后，我們予以以下兩種治療手段：

3、一，干細(xì)胞的移植。我們將已鑒定的E14C57BL/6-GFP鼠的嗅球干細(xì)胞用于干細(xì)胞移植。采用兩種途徑：⑴內(nèi)聽道的聽神經(jīng)根移植干細(xì)胞術(shù)。⑵聽力損傷側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈干細(xì)胞移植術(shù)。移植干細(xì)胞后，給予一定的外界聲刺激，觀察其遷移、存活、分化現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)觀察：經(jīng)由此兩種路徑移植后，在損傷的螺旋神經(jīng)節(jié)附近出現(xiàn)零星的干細(xì)胞團(tuán)。二，H2的保護(hù)作用。將聽力部分損傷的動(dòng)物，手術(shù)后定時(shí)放入H2治療箱內(nèi)治療，之后通過ABR檢測(cè)，聽力閾值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的下降。免疫組

4、織化學(xué)觀察：治療后SGN狀態(tài)較治療前，有比較明顯的改善。作為一種醫(yī)療氣體，H2近年來廣泛用于許多領(lǐng)域的研究和多種疾病的治療。但是，其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)和修復(fù)機(jī)制，目前仍然在探索。
　　本實(shí)驗(yàn)中，雖然在損傷SGN處有移植入的干細(xì)胞團(tuán)出現(xiàn)，但是沒有預(yù)期的良好效果，考慮是否因?yàn)槠渌囊恍┮蛩氐挠绊懀纾篠GN自身的遺傳發(fā)育特性。我們通過研究SGN發(fā)育中microRNA表達(dá)的變化，將得到對(duì)其影響明確的目的microRNA。在干細(xì)胞模擬發(fā)育的

5、過程中，觀察基因調(diào)控水平下，干細(xì)胞是否向SGN“傾向性”遷移、增殖、分化。本實(shí)驗(yàn)我們將E14、P1、P5以及成年鼠的SGN，采用基因芯片技術(shù)篩選，得到隨發(fā)育過程上調(diào)表達(dá)的17個(gè)，下調(diào)表達(dá)的miRNA19個(gè)。這一結(jié)果提示我們，這些差異表達(dá)microRNA很可能參與了大鼠耳蝸SGN的發(fā)育過程。其后，我們對(duì)芯片篩選得到的部分microRNA進(jìn)行q-PCR分析，最終確定了3種與microRNA芯片差異表達(dá)趨勢(shì)相符的miRNA，即miR-21，m