ARL-1在直腸癌細(xì)胞對(duì)醛類(lèi)化合物解毒中的作用研究.pdf

1、南華大學(xué)博士學(xué)位論文ARL1在直腸癌細(xì)胞對(duì)醛類(lèi)化合物解毒中的作用研究姓名：祖旭宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：廖端芳曹德良200705014ARL1在直腸癌細(xì)胞對(duì)醛類(lèi)化合物解毒中的作用研究摘要摘要由機(jī)體正常生理?xiàng)l件下，或病理?xiàng)l件下所產(chǎn)生的醛酮類(lèi)化合物如丙稀醛（acrolein）巴豆醛（crotonaldehyde）4羥基壬烯醛(4HNE)和丙二醛（malondiadehyde）等，如果在體內(nèi)積淀過(guò)多將對(duì)細(xì)胞內(nèi)許多組

2、分包括蛋白和核酸造成損害。這種損害將導(dǎo)致基因突變，染色體斷裂，細(xì)胞信號(hào)通路異常，嚴(yán)重的損害將導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死。而細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的防衛(wèi)系統(tǒng)可將該類(lèi)有毒代謝產(chǎn)物氧化或還原。人類(lèi)醛糖還原酶類(lèi)似蛋白質(zhì)1（ARL1）是屬于醛酮還原酶超家族的一個(gè)新成員，它在正常消化道中有較高表達(dá)，但對(duì)它的生物學(xué)功能還了解不多。該蛋白在原發(fā)性肝癌和肺癌中有極高表達(dá)，這說(shuō)明ARL1可能參與腫瘤的發(fā)生，發(fā)展或影響腫瘤細(xì)胞的藥物敏感性。本研究探討了ARL1在直腸癌細(xì)胞對(duì)醛類(lèi)

3、化合物進(jìn)行解毒中的作用。在研究中，檢測(cè)了重組ARL1對(duì)丙稀醛巴豆醛和4羥基壬烯醛的酶活性，結(jié)果表明，ARL1對(duì)丙稀醛（Km為0.1100.012mMVmax為3122.064.7nmolmgmin），巴豆醛（Km為0.0820.014mMVmax為2647.0132.2nmolmgmin）和4羥基壬烯醛（Km為0.0310.007mM，Vmax為3296245.9nmolmgmin）都有較高的酶活性。通過(guò)EGFPARL1融合蛋白在293

4、T細(xì)胞內(nèi)瞬時(shí)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照細(xì)胞比較，有EGFPARL1融合蛋白表達(dá)的細(xì)胞在平板單細(xì)胞生長(zhǎng)能力和軟瓊脂克隆形成能力方面增加了60%（p0.05）。在5μM丙稀醛存在的情況下，有EGFPARL1融合蛋白表達(dá)的細(xì)胞在其平板中的單細(xì)胞生長(zhǎng)能力和軟瓊脂克隆形成能力是對(duì)照細(xì)胞的3倍，并且其在軟瓊脂中所形成的克隆遠(yuǎn)大于對(duì)照細(xì)胞。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明，EGFPARL1融合蛋白在293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)明顯減少高濃度丙稀醛（25μM及50μM）所引起的細(xì)胞死亡