DEHP及DES對(duì)大鼠睪酮合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)影響和隱睪機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過(guò)用鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及乙烯雌酚（DES）染毒孕期（GND12-PND3）SD大鼠，統(tǒng)計(jì)子代雄鼠隱睪率，測(cè)血清睪酮量，測(cè)睪酮合成通路中關(guān)鍵酶：細(xì)胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)mRNA，急性調(diào)節(jié)蛋白酶(Star)mRNA和3β類固醇脫氫酶(3β- HSD)mRNA的相對(duì)表達(dá)量，從而初步探究環(huán)境內(nèi)分泌干擾物致子代大鼠隱睪的機(jī)理。
　　方法：購(gòu)買的SPF大鼠在屏蔽環(huán)境動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)

2、1周后，雌雄大鼠按2:1的比例合籠，次日8點(diǎn)將雌鼠逐一陰道涂片后顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)精子當(dāng)日記為孕期零天（GND0）。將懷孕母鼠取出放單獨(dú)一籠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組,玉米油組，DEHP低劑量組，DEHP中劑量組，DEHP高劑量組,DES組6個(gè)組別，每組8只。玉米油組:喂飼1ml玉米油/d，DEHP低劑量組：喂飼DEHP100mg/kg/d＋1ml玉米油/d，DEHP中劑量組：喂飼DEHP500mg/kg/d＋1ml玉米油/d，DEHP高劑量

3、組:喂飼 DEHP750mg/kg/d＋1ml玉米油/d，DES組：喂飼DES100mg/kg/d＋1ml玉米油/d。正常對(duì)照組：常規(guī)喂飼飼料，不給于其他處理。在雌鼠孕12天開(kāi)始按照上述劑量給予孕鼠灌藥至仔鼠生后3天。待F1代鼠生后30天時(shí)，處死子代雄鼠。統(tǒng)計(jì)各組子代雄鼠數(shù)量及隱睪仔鼠數(shù)目，顯微鏡下觀察睪丸組織學(xué)變化，Real-time PCR檢測(cè)雄激素關(guān)鍵酶P450scc酶，Star酶和3β-HSD酶的mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　

4、結(jié)果：孕期母鼠在窗口期（GND12-PND3）暴露于DEHP低，中、高劑量和DES都可引起生后30天部分SD大鼠隱睪。且隨著DEHP劑量的升高呈現(xiàn)隱睪發(fā)生率增加，低劑量組的隱睪率（22.6％）、中劑量組隱睪率（38.6%）、高劑量組隱睪率（46.1%）、DES組隱睪率（43.3%）與正常組相比都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。DEHP低、中、高劑量組及DES組染毒孕鼠后其仔鼠血清睪酮的濃度都出現(xiàn)減少趨勢(shì)，并且呈現(xiàn)劑量依賴性。DEHP中、高

5、劑量組和DES組與正常對(duì)照組比較，睪酮濃度明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義﹙P＜0.05﹚，但低劑量組其睪酮濃度與正常對(duì)照組及玉米油組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。正常對(duì)照組和玉米油組睪丸組織學(xué)顯示：生精細(xì)胞規(guī)整，生精小管之間無(wú)Leydig細(xì)胞聚集。DEHP低劑量組睪丸組織學(xué)無(wú)特異變化。但DEHP中、高劑量組可見(jiàn)Leydig細(xì)胞(間質(zhì)細(xì)胞)增生，且聚集成團(tuán)。DES組未見(jiàn)明顯Leydig細(xì)胞聚集，但有生精細(xì)胞減少，松散稀疏。DEHP低、

6、中、高劑量組P450scc，3β-HSD的mRNA的表達(dá)都減少。DEHP高劑量組P450scc和3β-HSD與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。DEHP各劑量組Star酶的mRNA的表達(dá)量增多且都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DES組三種酶的表達(dá)量都減少，但其中Star酶的mRNA的表達(dá)量與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：1.胚胎性發(fā)育關(guān)鍵期一定劑量DEHP和DES的暴露都會(huì)導(dǎo)致SD大鼠隱睪。2.DEHP中、高劑量組和DES組

7、SD大鼠Leydig細(xì)胞都有不同程度的聚集。3.DEHP中高劑量組和DES組血液睪酮水平（T）均減少且和對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（P＜0.05）。4.DEHP和DES都會(huì)影響SD大鼠的雄激素形成通路中的關(guān)鍵酶P450scc，3β-HSD和Star基因表達(dá)，DEHP及DES引起P450scc，3β-HSD酶基因表達(dá)下調(diào)，DEHP引起Star酶基因表達(dá)上調(diào)。5. DEHP和DES引致子代SD雄鼠隱睪的機(jī)制可能是通過(guò)影響睪酮合成關(guān)健酶P45