大鼠心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞乳酸閾及單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)情況的研究.pdf

1、目的：通過建立乳酸孵育模型觀察原代心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞活力并計(jì)算細(xì)胞存活率，探討大鼠心肌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的乳酸閾。并提取細(xì)胞蛋白，通過Western blot 方法行蛋白分析，觀察大鼠心肌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)情況。旨在為進(jìn)一步研究心肌細(xì)胞與非心肌細(xì)胞之間的乳酸穿梭奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:體外培養(yǎng)原代大鼠心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，添加pH 值相同、濃度不同的乳酸(1mmol/L，2mmol/L，4mmol/L，8

2、mmol/L，16mmol/L，32mmol/L)孵育，建立乳酸孵育模型，通過測(cè)定OD 值觀察細(xì)胞的活力并計(jì)算細(xì)胞存活率。提取原代心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的蛋白，并用Western blot 方法進(jìn)行蛋白分析，觀察MCT1及MCT4在這兩種細(xì)胞上的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)原代心肌細(xì)胞在乳酸濃度為2mmol/L和4mmol/L 時(shí)，其OD 值最大，細(xì)胞存活率最高，與其他組之間比較有顯著差異，P＜0.05。這兩組之間無差異，P﹥0

3、.05。(2)原代成纖維細(xì)胞在乳酸濃度為4mmol/L和8mmol/L 時(shí)，其OD 值最大，細(xì)胞存活率最高，與其他組之間比較有顯著差異，P＜0.05。這兩組之間無差異，P﹥0.05。(3)兩種細(xì)胞MCT1的表達(dá)量均比MCT4的表達(dá)高，P＜0.05。而且心肌細(xì)胞的MCT1，MCT4表達(dá)量均比成纖維細(xì)胞高，P＜0.05。 討論：原代心肌細(xì)胞在乳酸濃度為2mmol/L和4mmol/L 時(shí)，細(xì)胞活力最高，細(xì)胞存活率最高，說明在此濃度時(shí)細(xì)胞吸收乳

4、酸最多，給細(xì)胞提供了相對(duì)充足的能量，故細(xì)胞存活率較其它組高。由此推斷心肌細(xì)胞的乳酸閾為2mmol/L-4mmol/L。然而隨濃度更進(jìn)一步增高，細(xì)胞活力下降，可能是因?yàn)槿樗釢舛冗^高，細(xì)胞由以攝取乳酸為主轉(zhuǎn)為以排出乳酸為主，故細(xì)胞能量供應(yīng)減少，細(xì)胞存活率下降。同樣成纖維細(xì)胞在濃度為4mmol/L和8mmol/L 時(shí)，細(xì)胞活力最高，細(xì)胞存活率最高。由此推斷成纖維細(xì)胞的乳酸閾為4mmol/L-8mmol/L。MCT1和MCT4在原代心肌細(xì)胞和成

5、纖維細(xì)胞均有表達(dá)，說明這兩種細(xì)胞均具備乳酸穿梭的轉(zhuǎn)運(yùn)體，可以將乳酸轉(zhuǎn)入或轉(zhuǎn)出細(xì)胞。而且負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)入的MCT1 高表達(dá)，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)出的MCT4 低表達(dá)表明兩種細(xì)胞均以乳酸轉(zhuǎn)入及氧化利用為主。MCT4的低表達(dá)可能是因?yàn)镸CT4 需要某種刺激表達(dá)才會(huì)上調(diào)。同時(shí)心肌細(xì)胞上MCT1與MCT4的表達(dá)均比成纖維細(xì)胞上的高，提示心肌細(xì)胞乳酸代謝更活躍。
　　 結(jié)論:原代心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的乳酸閾的不同提示兩種細(xì)胞乳酸代謝方式不同，這是二者間可能存在乳