死亡受體（DR4）和類甲酰肽受體1（FPRL1）相互作用的研究.pdf

1、腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)發(fā)現(xiàn)于1995年，是腫瘤壞死因子(TNF)超家族的成員，它能夠特異地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而對(duì)大多數(shù)正常細(xì)胞沒(méi)有毒性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其有五種受體：死亡受體DR4和DR5、誘騙受體DcR1、DcR2和游離型受體OPG。類甲酰肽受體1(FPRL1)是本實(shí)驗(yàn)室采用酵母雙雜交技術(shù)以DR4的胞內(nèi)區(qū)為誘餌，從人白細(xì)胞cDNA文庫(kù)中篩選到的。本研究使用GSTpull-down實(shí)驗(yàn)和在THP-1細(xì)胞中進(jìn)行內(nèi)源性免疫共沉淀

2、實(shí)驗(yàn)證明了DR4和FPRL1在體內(nèi)體外都可特異性結(jié)合。我們進(jìn)而從人白細(xì)胞中提取總RNA，以RT-PCR擴(kuò)增出FPRL1，構(gòu)建真核表達(dá)載體FPRL1/pcDNA6-V5-HisB-HA，轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，得到穩(wěn)定表達(dá)FPRL1的細(xì)胞株。發(fā)現(xiàn)FPRL1高表達(dá)使Hela細(xì)胞抵抗TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，證明FPRL1參與TRAIL的信號(hào)傳遞。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)DR4的激動(dòng)劑TRAIL能夠促進(jìn)THP-1細(xì)胞向FPRL1的激動(dòng)劑W肽的趨化作用；TRA

3、IL和W肽都可以激活細(xì)胞內(nèi)的激酶ERK和AKT，兩者共同處理對(duì)于激活ERK和AKT以及細(xì)胞內(nèi)Ca離子流動(dòng)均具有協(xié)同作用，提示TRAIL/DR4介導(dǎo)的信號(hào)通路與W肽/FPRL1介導(dǎo)的信號(hào)通路之間存在交叉對(duì)話(cross-talk)。 在THP-1細(xì)胞和人中性粒細(xì)胞中，我們還首次證明W肽可以促進(jìn)內(nèi)源性的TRAIL表達(dá)，NF-κB的特異性抑制劑LLnL則可以抑制TRAIL表達(dá)，提示W(wǎng)肽促進(jìn)內(nèi)源性的TRAIL表達(dá)是受NF-κB調(diào)控的；在