姜黃素對對比劑引起的腎小管上皮細胞損傷的保護作用研究.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細胞(NRK52E),探討姜黃素(Curcumin,CMN)能否通過誘導NRK52E細胞表達血紅素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)減輕泛影葡胺所致的細胞毒性作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)NRK52E細胞,將實驗研究分為四部分進行:1.將培養(yǎng)的NRK52E細胞分別以終濃度為0、50、100、200μL／mL的泛影葡胺孵育4h。檢測各組細胞的細胞活力及培養(yǎng)液中LDH活力,分析泛影葡胺

2、致NRK52E細胞毒性的量效關系。2.將培養(yǎng)的NRK52E細胞以終濃度為100μL／mL的泛影葡胺分別孵育0、2h、4h、6h,同時加設與100μL／mL泛影葡胺等滲的甘露醇孵育6h作為滲透壓對照組。檢測各組細胞活力及培養(yǎng)液中LDH活力；分析泛影葡胺致NRK52E細胞毒性的時效關系,并探明實驗劑量的泛影葡胺所產生的滲透壓對細胞的影響。3.將培養(yǎng)的NRK52E細胞分別以終濃度為0、5、10、20μmol／L的CMN孵育8h,檢測各組細胞活

3、力、培養(yǎng)液中LDH活力,分析CMN是否具有細胞毒性作用。Western blot檢測各組細胞HO-1表達與HO-1活力,了解CMN誘導HO-1的表達情況。4.將培養(yǎng)的NRK52E細胞分為A、B、C、D四組,分別給予單純培養(yǎng)基、終濃度為100μL／mL泛影葡胺、終濃度為100μL／mL泛影葡胺+10μmol／L CMN、終濃度為100μL／mL泛影葡胺+10μmol／LCMN+10μmol／L ZnppⅨ四種不同方式孵育4h；檢測各組細胞

4、活力、培養(yǎng)液中LDH活力和MDA濃度；流式AnnexinⅤ-FITC／PI雙染法測定細胞凋亡率；Western blot檢測細胞bcl-2、bax表達及HO—1表達與HO-1活力。分析CMN在泛影葡胺所致的細胞損傷中是否具有保護作用及其可能的保護機制。
　　 結果:1.泛影葡胺呈時間依賴和劑量依賴性抑制NRK52E細胞活力(P<0.05)并增加培養(yǎng)液中LDH活力(P<0.05)；終濃度為100μL／mL的泛影葡胺所產生的滲透壓對

5、細胞無明顯損傷(P>0.05)。2.CMN終濃度在0-20μmol／L內無明顯細胞毒性作用(P>0.05)；CMN呈濃度依賴性誘導NRK52E細胞HO-1表達(P<0.05)。3.與A組比較,B組、C組、D組細胞活力均明顯降低(P<0.05),培養(yǎng)液中LDH活力和MDA的含量均顯著升高(P<0.05),細胞凋亡率也明顯增高(P<0.05),對應的細胞bcl-2及bax表達均顯著增加(P<0.05),但只有C組bcl-2／bax比值明顯升

6、高(P<0.05)；此外,盡管B、C、D組HO-1表達均明顯增加,但只有C組HO-1活力增加(P<0.05)而在D組則是明顯降低(P<0.05)。與B組及D組比較,C組NRK52E細胞活力增加(P<0.05)、培養(yǎng)液中LDH和MDA的含量降低(P<0.05)、細胞凋亡率降低(P<0.05),bcl-2、bax表達及bcl-2／bax比值明顯升高,HO-1表達及其活性也都明顯增加。D組與B組間多數(shù)指標均無明顯差異。
　　 結論:泛