腺病毒攜帶的反義細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶-2基因治療減緩移植物血管和腎臟的慢性排斥反應(yīng).pdf

1、第一部分大鼠反義細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶-2腺病毒載體的構(gòu)建 目的：正義基因反向克隆法構(gòu)建大鼠anti-ERK2腺病毒載體。 方法：酶切質(zhì)粒p3XFLAG-CMV7.1-ERK2，得到ERK2cDNA片段，連接到T載體進(jìn)行測(cè)序，經(jīng)測(cè)序正確反向克隆法插入質(zhì)粒pShuttle中，最后轉(zhuǎn)入AdEasy(tm)XLAdenoviralVectorSystem系統(tǒng)中得到anti-ERK2基因腺病毒載體。 結(jié)果：DraⅠ和NotⅠ

2、雙酶切鑒定anti-ERK2基因腺病毒載體，發(fā)現(xiàn)插入的基因序列與插入方向均符合預(yù)期目標(biāo)。 結(jié)論：成功構(gòu)建了大鼠anti-ERK2腺病毒載體，為研究移植排斥中ERK2基因治療的作用提供了良好工具。 第二部分腺病毒攜帶的反義細(xì)胞外信號(hào)激酶-2基因治療對(duì)移植物血管和腎臟慢性排斥反應(yīng)損傷的保護(hù)作用 目的：探討反義細(xì)胞外信號(hào)激酶-2基因治療對(duì)移植物血管和腎臟的慢性排斥反應(yīng)損傷的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。 方法：選用血管

3、移植(Brown-Norway→Lewis)和腎臟移植(Fisher344→Lewis)二種慢性排斥反應(yīng)模型，移植前對(duì)同種血管移植物和腎臟移植物進(jìn)行體外Adanti-ERK2基因轉(zhuǎn)染，分別于血管移植后60天和腎臟移植后90天分析慢性排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)移植物的結(jié)構(gòu)和功能變化、目的基因和蛋白的表達(dá)以及免疫系統(tǒng)的相應(yīng)反應(yīng)。 結(jié)果：Adanti-ERK2基因治療減少了移植物內(nèi)ERK目的基因蛋白的表達(dá)，緩解了慢性排斥反應(yīng)對(duì)同種血管移植物和腎臟