胸膜肺炎放線桿菌APXⅠA基因的克隆與原核表達(dá)及APP、PM、HPS復(fù)合PCR檢測方法的建立.pdf

1、　　本論文主要進(jìn)行了以下兩個方面的研究：1.ApxlA基因的克隆和表達(dá):　　本試驗(yàn)根據(jù)APXⅠA的特性，分別對其N端疏水功能區(qū)和C端Ca2+結(jié)合區(qū)進(jìn)行克隆和表達(dá)。本試驗(yàn)從血清10型APP中提取菌體DNA，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到APXⅠA的N端疏水功能區(qū)和C端Ca2+結(jié)合區(qū)基因，分別將其克隆到pGEM-Teasy載體中，經(jīng)酶切鑒定和測序后克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-32a中，將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)，在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)約58

2、kd和79kd的融合蛋白，SDS-PAGE電泳和Westernblotting檢測證實(shí)上述兩段基因片段均獲得高效表達(dá)且表達(dá)產(chǎn)物具有免疫學(xué)活性。本試驗(yàn)為研究以上兩個功能區(qū)的生物學(xué)活性及在不同毒素中共同的抗原表位奠定基礎(chǔ)，也為研究亞單位疫苗和基因工程疫苗提供了新的思路。 2.胸膜肺炎放線桿菌、豬多殺性巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌復(fù)合PCR方法的建立:　　由于豬的呼吸系統(tǒng)疾病多為混合感染，建立一種快速便捷的檢測多種呼吸系統(tǒng)疾病的方法勢在必