Tf-PEG-PEI載干擾質粒靶向沉默NS對前列腺癌骨轉移癌作用的研究.pdf

1、目的：通過建立裸鼠前列腺癌骨轉移瘤模型及靜脈應用Tf-PEG-PEI負載的NS靶向干擾質粒，觀察NS沉默后對移植瘤的影響，探討PSMAe/p驅動shRNA靶向干擾NS基因的效果及特異性，進一步評價在全身給藥途徑下非病毒載體Tf-PEG-PEI在動物體內(nèi)的基因轉移能力及其安全性。
　　方法：(1)將非病毒載體聚乙烯亞胺(PEI)修飾為Tf-PEG-PEI；對已構建成功的pPSMAe/p-UPRT、PSMAe/p-shNS-poly(

2、A)兩種質粒，轉化細菌，擴增、提取并純化質粒，進行酶切鑒定及測序鑒定，以確保序列完全正確。(2)培養(yǎng)表達PSMA的LNCap細胞構建裸鼠前列腺癌骨轉移模型，將裸鼠分為5組，每組4只，分別根據(jù)不同組別尾靜脈注射不同的質粒及載體復合物，每5天注射1次，共注射5次，第一組：250μgTf-PEG-PEI和50μgPSMAe/p-NS-silencer，第二組：250ggTf-PEG-PEI和50μgpPSMAe/p-UPRT，第三組：250μ

3、gPEI和50μgPSMAe/p-NS-silencer，第四組：250μgTf-PEG-PEI，第五組：50μgPSMAe/p-NS-silencer。(3)治療過程中觀測腫瘤體積變化。處死裸鼠后取瘤，采用免疫組織化學染色和Westernblot檢測NS基因的蛋白表達。(4)獲取裸鼠心、肝、脾、肺、腎組織行HE染色，觀察有無中毒情況。
　　結果：(1)成功合成非病毒載體Tf-PEG-PEI，經(jīng)核磁共振氫譜鑒定連接成功。轉化細菌，

4、擴增、提取并純化足量的兩種質粒，經(jīng)酶切及測序鑒定質粒正確。(2)成功構建LNCap細胞裸鼠前列腺癌骨轉移瘤模型，根據(jù)不同組別尾靜脈注射不同的質粒及載體復合物后，通過計算腫瘤體積和繪制腫瘤生長曲線，發(fā)現(xiàn)第一組與其余四組相比，在治療過程中腫瘤體積明顯減小，差別均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其余四組相比，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。移植瘤通過NS免疫組化染色和Westernblot檢測NS基因的蛋白表達，第一組與其余四組相比，NS染

5、色陽性率明顯下降(P<0.05)，Westernblot檢測NS表達明顯減弱(P<0.05)。而其余四組之間NS染色陽性率無明顯差別(P>0.05)，Westernblot檢測NS表達也無明顯差別(P>0.05)。(3)裸鼠心、肝、脾、肺、腎組織行HE染色，未見明顯中毒表現(xiàn)。
　　結論：在裸鼠前列腺癌骨轉移瘤模型中，PSMAe/p能在高表達PSMA的LNCap細胞中特異性驅動sheRNA轉錄，靶向干擾NS基因。Tf-PEG-PEI