基于微透析與超快速液相色譜技術(shù)的唑類抗真菌藥物經(jīng)皮藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、本文建立了微透析取樣技術(shù)與超快速液相色譜分析技術(shù)相結(jié)合的研究系統(tǒng)，以唑類抗真菌藥物艾迪康唑和復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿為研究對象進(jìn)行經(jīng)皮藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　 第一部分微透析與超快速液相色譜技術(shù)結(jié)合的研究系統(tǒng)的建立與評價(jià)
　　 一、超快速液相色譜與高效液相色譜性能比較
　　 本章以一類新藥胰島素增敏劑MCC-555為分析對象，分別采用島津超快速液相色譜和島津高效液相色譜建立其色譜分析方法，并對二者的儀器性能和試驗(yàn)參

2、數(shù)進(jìn)行了比較。超快速液相色譜通過以下性能實(shí)現(xiàn)樣品的快速分析：低容量的管路和流通池減少了色譜柱的峰展寬；Prominence SIL-20自動(dòng)進(jìn)樣器的10 s超快速進(jìn)樣；柱溫最高可達(dá)85℃；快速的數(shù)據(jù)采集以得到較好的信號追蹤。這些性能加上2.2μm小顆粒的色譜柱可以縮短分析時(shí)間5-6倍，節(jié)省了儀器和分析時(shí)間，可用于藥物的高通量藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　 二、自制微透析探針的研制
　　 本章研制了線性微透析探針和柔性微透析探針，

3、自制微透析探針技術(shù)的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性達(dá)到商業(yè)用探針?biāo)?。因?yàn)槭亲灾铺结槪结樀耐肝瞿つらL可以按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大小和實(shí)驗(yàn)特定要求制作不同長度的微透析探針，增加透析膜長度可以擴(kuò)大透析交換面積，滿足不同藥物分析的需要，為抗真菌藥物艾迪康唑和復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿藥代動(dòng)力學(xué)研究提供了優(yōu)越的技術(shù)支持。
　　 三、微透析與超快速液相色譜技術(shù)結(jié)合的研究系統(tǒng)的建立與評價(jià)
　　 微透析與超快速液相色譜技術(shù)結(jié)合的研究系統(tǒng)的建立與評價(jià)以艾迪康唑

4、為模型藥物，采用超快速液相色譜分析艾迪康唑的微透析體內(nèi)外回收率。液相色譜條件為：Shimadzu ProminenceUFLCTMC18 column色譜柱；采用色譜科保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙睛：0.025％三乙胺；流速：0.5 ml/min；紫外檢測波長：230nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μl。每個(gè)樣品的分析周期為2 min。艾迪康唑體外回收率的測定采用透析法、反透析法和零凈通量法，體內(nèi)回收率采用反透析法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在較高流速3μl/

5、min透析法和反透析法兩種方法測得回收率均保持高度一致；回收率隨著灌流液流速的增大而減??；探針的回收率與溶媒中艾迪康唑的濃度無關(guān)；利用零凈通量法能準(zhǔn)確地測定溶媒中艾迪康唑的濃度及其回收率。體外回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：艾迪康唑在8 h回收率基本保持穩(wěn)定，線性微透析探針回收率為47.64％±4.29％，柔性微透析探針回收率為38.05％±6.63％：體內(nèi)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：艾迪康唑在8 h回收牢基本保持穩(wěn)定，線性微透析探針回收率為33.57％±

6、5.41％，柔性微透析探針回收率為27.86％±3.08％。本研究表明微透析與超快速液相色譜結(jié)合的高通量研究系統(tǒng)可用于艾迪康唑的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　 第二部分基于MD-UFLC系統(tǒng)的艾迪康唑乳膏在SD大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和體外藥效學(xué)研究
　　 一、SD大鼠皮膚透析液和血液透析液中艾迪康唑的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　 本章首次基于微透析與超快速液相色譜技術(shù)結(jié)合的研究系統(tǒng)同時(shí)研究了艾迪康唑在SD大鼠皮膚透析液和血液透析液中

7、的藥代動(dòng)力學(xué)。采用微透析技術(shù)在SD大鼠皮下和血管同時(shí)植入探針進(jìn)行取樣，這對于研究各時(shí)間點(diǎn)艾迪康唑同時(shí)在皮膚和血液中的真實(shí)分布有著重要意義。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)表明艾迪康唑在皮膚透析液中的Cmax及AUC均高于血液透析液，艾迪康唑在二者中的濃度曲線大致相同，AUC皮膚和AUC血液的比值接近20，說明游離艾迪康唑在皮膚組織間液中濃度遠(yuǎn)高于血液中濃度，表明藥物在靶組織中有較高的分布。微透析技術(shù)測定的皮膚透析液中藥物ALJC/Cmax和血液透析液中藥

8、物AUC/Cmax具有較好的定量關(guān)系，說明SD大鼠透皮給藥艾迪康唑乳膏后血漿中的藥物質(zhì)量濃度與皮膚組織中藥物質(zhì)量濃度相關(guān)。結(jié)果表明基于MD-UFLC系統(tǒng)可用于研究非結(jié)合型艾迪康唑在SD大鼠靶器官以及血液中的藥代動(dòng)力學(xué)。
　　 二、艾迪康唑體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)與體外藥效學(xué)研究
　　 本章研究了艾迪康唑的體外抗真菌活性結(jié)合體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的PK/PD參數(shù)和體外抗真菌濃度-藥效曲線。表明皮膚作為靶器官其藥物濃度含量最高，同時(shí)藥物在皮膚

9、上有較長的滯留時(shí)間，說明藥物在皮膚上形成藥物貯庫，發(fā)揮局部藥效，達(dá)到藥物局部給藥局部作用的目的，可以維持較長時(shí)間抗真菌活性作用。從體外抗真菌濃度-藥效曲線可知皮膚透析液中艾迪康唑濃度對12株臨床常見致病真菌均具有良好的抑制作用，抑菌率可高于90％，且在80-680 min范圍內(nèi)抑菌率高達(dá)100％，具有較好的抗真菌活性。
　　 第三部分基于MD-UFLC系統(tǒng)的復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏在豚鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及相互作用的研究

10、　　 一、豚鼠生物樣品中硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿定量分析方法的建立與確證
　　 首次建立皮膚透析液和血漿中硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿的UFLC定量分析方法。皮膚透析液中硝酸咪康唑液相色譜條件：色譜分析采用Shimadzu
　　 Prominence UFLCTM C18 column色譜柱；采用色譜科保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙睛：0.033％三乙胺，使用前經(jīng)過0.45μm的微孔濾膜過濾；流速：0.5 ml/min；紫外檢測波長：23

11、0 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl；每個(gè)樣品的分析周期為1.5 min。血漿樣品中硝酸咪康唑液相色譜條件：色譜分析采用Shimadzu Prominence UFLCTMC18
　　 column色譜柱；采用色譜科保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙睛：0.033％三乙胺，使用前經(jīng)過0.45μm的微孔濾膜過濾；流速：0.5 ml/min；紫外檢測波長：230 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μl；每個(gè)樣品的分析周期為2 min。皮膚透析液中

12、鹽酸小檗堿液相色譜條件：色譜分析采用Shimadzu Prominence UFLCTMC18 column色譜柱；采用色譜科保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙睛：0.048％三乙胺，使用前經(jīng)過0.45μm的微孔濾膜過濾；流速：0.5 ml/min；紫外檢測波長：346 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl；每個(gè)樣品的分析周期為1.5 min。血漿中鹽酸小檗堿液相色譜條件：色譜分析采用ShimadzuProminence UFLCTMC18column

13、色譜柱；采用色譜科保護(hù)柱；流動(dòng)相組：乙睛：0.048％三乙胺，使用前經(jīng)過0.45μm的微孔濾膜過濾；流速：0.5 ml/min；紫外檢測波長：346nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl；每個(gè)樣品的分析周期為2 min。建立的體內(nèi)分析方法符合生物樣品檢測要求，可用于豚鼠復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏中硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　 二、硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿微透析體內(nèi)外回收率的測定
　　 研究了硝酸咪康唑和鹽

14、酸小檗堿的線性微透析探針體內(nèi)外回收率。體外回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿在8 h回收率基本保持穩(wěn)定，硝酸咪康唑線性微透析探針回收率為78.33％±4.81％，鹽酸小檗堿線性微透析探針回收率為61.21％±3.32％。體內(nèi)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿在8h回收率基本保持穩(wěn)定，硝酸咪康唑線性微透析探針回收率為72.13％±1.77％，鹽酸小檗堿線性微透析探針回收率為52.47％±0.53％。本研究表明探針回收率隨著

15、灌流液流速的增大而減??；且回收率與溶媒中硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿的濃度無關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明微透析技術(shù)可用于硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿的藥代動(dòng)力學(xué)研究，反透析法可作為體內(nèi)微透析研究中硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿回收率的測定方法。
　　 三、豚鼠皮膚給藥復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏藥代動(dòng)力學(xué)及相互作用的研究
　　 本章基于MD-UFLC系統(tǒng)研究了復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑在動(dòng)物體內(nèi)的單劑量藥代動(dòng)力學(xué)與合并用藥時(shí)相互作用。本實(shí)

16、驗(yàn)選擇6只豚鼠雌雄各半，隨機(jī)分成三組，采用自身對照、隨機(jī)交叉實(shí)驗(yàn)方法，選擇三制劑三周期的3×3拉丁方設(shè)計(jì)給藥方案。皮膚給藥復(fù)方試驗(yàn)制劑選擇含硝酸咪康唑1.5％、鹽酸小檗堿1.5％的混合物軟膏，對照制劑分別為1.5％硝酸咪康唑軟膏和1.5％的鹽酸小檗堿軟膏。通過在豚鼠體內(nèi)的臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究，分別估算以硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿表征的復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑的相對生物利用度和其它藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并采用方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)

17、行統(tǒng)計(jì)比較分析，考察復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑中硝酸咪康唑和鹽酸小檗堿合并用藥的藥代動(dòng)力學(xué)相互影響，為臨床實(shí)驗(yàn)提供參考依據(jù)。
　　 單劑量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以硝酸咪康唑表征的復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑的相對生物利用度符合要求。進(jìn)一步對InCmax、InAUC進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑和硝酸咪康唑軟膏對照制劑雙單側(cè)t檢驗(yàn)合格，即單用硝酸咪康唑及與鹽酸小檗堿合用時(shí)硝酸咪

18、康唑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無明顯改變，表明復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑合并用藥不存在藥代動(dòng)力學(xué)相互影響。以鹽酸小檗堿表征的復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑的相對生物利用度符合要求。進(jìn)一步對InCmax、InAUC進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小檗堿軟膏復(fù)方試驗(yàn)制劑和鹽酸小檗堿軟膏對照制劑雙單側(cè)t檢驗(yàn)合格，即單用鹽酸小檗堿及與硝酸咪康唑合用時(shí)鹽酸小檗堿的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無明顯改變，表明復(fù)方硝酸咪康唑鹽酸小