胰島素對犬自體移植靜脈的保護(hù)及其新生內(nèi)膜過度增生抑制的研究.pdf

1、研究背景：
　　近年來，隨著社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展、人民生活水平提高、就業(yè)壓力增大、生活方式改變、人口急速老齡化和易患因素發(fā)病率的逐年上升，心血管疾病已成為危害人們健康的“第一殺手”。由于科技進(jìn)步，針對心血管疾病的藥物和介入治療取得了長足進(jìn)步，然而，冠狀動脈旁路移植術(shù)（CABG）和周圍動脈旁路移植術(shù)在復(fù)雜心血管病變的處理上仍有著不可替代的作用。自體靜脈移植物，尤其是大隱靜脈移植物（SVG），由于方便取材和管段較長，是動脈旁路移植術(shù)中最常用移

2、植物。但是，較之乳內(nèi)動脈移植物（IMAG），較低的通暢率嚴(yán)重降低了SVG的臨床應(yīng)用價(jià)值。因此，如何提高SVG通暢率，仍是眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。越來越多的臨床證據(jù)表明極化液（GIK）/胰島素應(yīng)用可明顯改善CABG術(shù)后糖尿病和非糖尿病患者的預(yù)后，而且，合模擬動脈旁路移植術(shù)模型，分別于移植靜脈再灌注前5分鐘直到之后4小時(shí)，給予以下4種液體以2mL/kg/h靜脈輸注：(1)假手術(shù)組(Sham：0.9％NaCL)；(2)生理鹽水（Vehicle:0

3、.9％氯化鈉）；(3)GK（葡萄糖-鉀液:葡萄糖:250g/L,氯化鉀：80mmol/L）；(4)GIK(葡萄糖:250g/L,胰島素:60U/L,氯化鉀：80mmol/L)；(5)GIK+Wort(Wortmannin，2.0μg/kg/h,再灌注前5min開始，持續(xù)1h靜脈輸注)。之后取出頸外靜脈移植物行TUNEL凋亡染色和激活的caspase-3免疫組化染色，用Westernblot法檢測頸外靜脈移植物中caspase-3活性、A

4、kt和eNOS磷酸化水平。在另一組實(shí)驗(yàn)中，雜種犬16只，隨機(jī)分為2組，每組8只，建立同樣模型，分別于移植靜脈再灌注前5分鐘直到之后4小時(shí)，給予以下2種液體以2mL/kg/h靜脈輸注：(1)生理鹽水；(2)GIK；之后分別給予生理鹽水0.5mL和胰島素4U(并按此分為兩組)，2次/日，皮下注射，連續(xù)1月，于術(shù)后29天，腹腔注射BrdU（50mg/kg），24小時(shí)后處死犬，取出靜脈移植物和正常頸外靜脈，分別行BrdU摻入和eNOS免疫組化染

5、色，用Westernblot法檢測其中α-平滑肌肌動蛋白表達(dá)狀況，用Verhoeff-vanGieson染色法衡量新生內(nèi)膜增生程度。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　第一部分實(shí)驗(yàn)：
　　1.術(shù)后短期內(nèi)移植靜脈中存在ECs和VSMCs的大量凋亡；
　　2.GK處理可加重ECs和VSMCs的凋亡(與生理鹽水組比較，P<0.05)；
　　3.GIK可顯著降低I/R后移植靜脈ECs和VSMCs的凋亡指數(shù)（分別與生理鹽水組和GK

6、組比較，P<0.001）和中/內(nèi)膜caspase-3的激活程度（分別與生理鹽水組和GK組比較，P<0.01）；
　　4.GK處理后明顯抑制移植靜脈中Akt和eNOS的磷酸化，并刺激caspase-3的活化（與生理鹽水組比較，P<0.05），GIK處理后則明顯增強(qiáng)了Akt和eNOS的磷酸化（分別與生理鹽水組和GK組比較，P<0.001），并明顯抑制caspase-3的活化（P<0.05）；加用Wortmannin后，GIK的這種效應(yīng)

7、被明顯消除；
　　第二部分實(shí)驗(yàn)：
　　1.在術(shù)后1月，應(yīng)用胰島素可明顯促進(jìn)犬移植靜脈中α-平滑肌肌動蛋白的表達(dá)（分別與犬正常頸外靜脈和生理鹽水組比較，P<0.001）；
　　2.應(yīng)用胰島素后明顯抑制犬移植靜脈中/內(nèi)膜的細(xì)胞增殖（細(xì)胞增殖指數(shù)11.15％±0.93％與生理鹽水組的25.55％±2.02％比較，P<0.001);
　　3.應(yīng)用胰島素后明顯促進(jìn)犬移植靜脈內(nèi)膜eNOS的表達(dá)（分別與正常靜脈組和生理鹽水組比

8、較，P<0.05）；
　　4.胰島素應(yīng)用可減輕移植靜脈新生內(nèi)膜增生程度（中/內(nèi)膜厚度136.51±8.97μm，與生理鹽水組的185.92±8.34μm比較,P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.再灌注期間高血糖癥損傷自體移植靜脈，應(yīng)用胰島素可有效保護(hù)自體移植靜脈；
　　2.胰島素保護(hù)自體移植靜脈的效應(yīng)是通過PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制I/R后ECs和VSMCs凋亡來實(shí)現(xiàn)的；
　　3.術(shù)后短期內(nèi)連續(xù)應(yīng)用