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文檔簡(jiǎn)介
1、胸腺瘤是較常見(jiàn)的胸外科疾病,約有50%的胸腺瘤病人伴重癥肌無(wú)力,對(duì)其病因診斷和治療都有一定困難。有些病例術(shù)后癥狀長(zhǎng)期不緩解甚至惡化,嚴(yán)重困擾患者和診治醫(yī)生。特別在臨床研究發(fā)現(xiàn),盡管年齡、性別、社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位等一些社會(huì)因素相同,組織學(xué)類型、分化等病理學(xué)改變相同的胸腺瘤病人,有些合并重癥肌無(wú)力,有些則不合并重癥肌無(wú)力。這就使我們從基因水平進(jìn)行考慮是否是由于胸腺瘤本身或胸腺瘤存在引起瘤旁胸腺組織細(xì)胞內(nèi)與自身免疫疾病有關(guān)的基因發(fā)生了某種變異,而導(dǎo)
2、致機(jī)體免疫功能的紊亂所致。本研究通過(guò)檢測(cè)胸腺瘤合并MG患者瘤組織中凋亡相關(guān)基因的表達(dá)水平來(lái)探討胸腺瘤組織的細(xì)胞凋亡狀態(tài)與MG發(fā)病的關(guān)系,進(jìn)而探討MG的病因。 材料和方法: 一、材料 (一)研究對(duì)象 所有標(biāo)本取自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院。胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力組23例。參考WHO1999年胸腺腫瘤國(guó)際組織學(xué)分類,其中A型3例、AB型10例、B1型5例、B2型3例、B3型2例。均經(jīng)新斯的明及肌電圖檢查陽(yáng)性確診MG
3、,術(shù)后病理確診胸腺瘤。胸腺瘤非重癥肌無(wú)力組:18例。參考WHO1999年胸腺腫瘤國(guó)際組織學(xué)分類,其中A型1例、AB型8例、B1型5例、B2型2例、B3型2例。術(shù)前檢查患者無(wú)MG及其它自身免疫性疾病,術(shù)后病理確診胸腺瘤。 (二)主要試劑、儀器和來(lái)源 多克隆兔抗人Fas抗體、單克隆鼠抗人Bcl—2抗體、免疫組化S-P試劑盒和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司;美國(guó)Thermo自動(dòng)免疫組化儀. 二、方法
4、 (一)實(shí)驗(yàn)方法:用鏈霉素抗生物素蛋白—過(guò)氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測(cè)Fas和Bcl—2的表達(dá)。結(jié)果判定:Fas和Bcl—2蛋白定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。由3名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師在雙盲法下獨(dú)立計(jì)數(shù)。染色切片上陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于10%者判定為陽(yáng)性標(biāo)本[5]。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10~24%為(+);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25~49%為(++);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50~74%為(+++);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于75%為(++++)。
5、(二)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:對(duì)所得結(jié)果各組間采用等級(jí)資料兩個(gè)獨(dú)立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 一、切片HE染色觀測(cè)結(jié)果 正常胸腺組織結(jié)構(gòu)完整,髓質(zhì)及皮質(zhì)分界清楚,小葉間由大量纖維組織及脂肪組織充填。高齡患者與低齡患者比較,只是胸腺脂肪組織所占比例增高而已。 胸腺瘤組織由上皮細(xì)胞與淋巴細(xì)胞以不同比例混合組成。上皮細(xì)胞為圓形或卵圓形,體積較淋巴細(xì)胞大,分布于整個(gè)胸腺中,無(wú)皮質(zhì)髓
6、質(zhì)之分,結(jié)構(gòu)單一,胞漿量少,細(xì)胞核染色較淺。 二、兩組標(biāo)本Fas和Bcl—2檢測(cè)結(jié)果 Fas和Bcl—2陽(yáng)性染色可在細(xì)胞膜或細(xì)胞漿呈棕黃色。Fas和Bcl—2陽(yáng)性細(xì)胞在正常胸腺的髓質(zhì)及皮質(zhì)均有分布,但Bcl—2以髓質(zhì)為。Fas和Bcl—2陽(yáng)性細(xì)胞在胸腺瘤組織中呈均勻分布,F(xiàn)as陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在上皮細(xì)胞為主的腫瘤細(xì)胞中,Bcl—2陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在淋巴細(xì)胞為主的腫瘤細(xì)胞中。胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力組Fas的表達(dá)水平明顯高于胸腺
7、瘤非重癥肌無(wú)力組(Fas:u=3.802,P<0.01);胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力組Bcl—2的表達(dá)水平明顯低于胸腺瘤非重癥肌無(wú)力組(Bcl—2: u=2.873,P<0.01)。 結(jié)論: 1、胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力組與胸腺瘤非重癥肌無(wú)力組Fas陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的顯著差異,提示Fas在胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力患者的發(fā)病中有重要意義。 2、胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力組與胸腺瘤非重癥肌無(wú)力組Bcl—2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的顯著差異,提示Bcl—2在胸腺瘤伴
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