LOX對胃癌細胞VM的作用及與PDGFR的關(guān)系.pdf

1、目的：以胃癌細胞為研究對象，探討賴氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)和血小板衍生生長因子受體（platelet derived growth factor receptor，PDGFR）對胃癌細胞血管生成擬態(tài)（vasculogenic mimicry，VM）的影響；并分析胃癌血管生成擬態(tài)的形成中LOX與PDGFR的關(guān)系。
　　方法：培養(yǎng)胃癌細胞MGC-803和BGC-823。添加不同濃度LOX后，體外劃痕實驗檢測LO

2、X對BGC-823遷徙能力的影響；外源性加入不同濃度的LOX和用LOX的抑制劑β-氨基丙腈（beta-aminopropionitrile,BAPN）作用胃癌細胞后檢測胃癌細胞VM的形成情況；用PDGFR的抑制劑AG1295、AG1296作用胃癌細胞后檢測胃癌細胞VM的形成情況；用不同濃度LOX和BAPN作用于胃癌細胞后，Western-Blot檢測PDGFR-α和PDGFR-β的表達情況；用AG1295、AG1296完全抑制PDGFR

3、后添加不同濃度LOX和BAPN，檢測胃癌細胞VM的形成情況。
　　結(jié)果：1、體外劃痕實驗表明，2.5nM的LOX從8h開始就可以促進BGC-803的遷徙，隨著LOX的增加，胃癌細胞的遷徙能力增強；無血清培養(yǎng)下，添加2.5nM的LOX24h后細胞遷徙能力開始增強，而添加5nM的LOX自8h即可增強細胞的遷徙（p<0.05）。
　　2、體外二維細胞培養(yǎng)PAS染色表明，2種胃癌細胞株，隨著LOX濃度的增加，VM形成的數(shù)量也增加，L

4、OX濃度與VM的形成呈正相關(guān)（rMGC-803=0.847和rBGC-823=0.851,P<0.05）；VM的形成可被BAPN抑制，隨著BAPN的濃度增加，VM形成的數(shù)量相應(yīng)減少，BPAN與VM的形成呈現(xiàn)負相關(guān)（rMGC-803=-0.791和rBGC-823=-0.834,P<0.05）。
　　3、體外三維培養(yǎng)檢測表明，2種胃癌細胞株，隨著LOX濃度的增加，VM形成的數(shù)量也增加，LOX濃度與VM的形成呈正相關(guān)（rMGC-803

5、=0.910，rBGC-823=0.742,P<0.05）；同樣，隨著BAPN的濃度增加，VM形成的數(shù)量相應(yīng)減少，BPAN與VM的形成呈現(xiàn)負相關(guān)（rMGC-803=-0.779，rBGC-823=-0.894,P<0.05）。
　　4、體外二維培養(yǎng)PAS染色檢測表明BGC-803中隨著AG1295、AG1296的濃度增加，VM形成的數(shù)量減少，AG1295、AG1296濃度與VM的形成呈負相關(guān)（rAG1295=-0.733，rAG1

6、296=-0.792,P<0.05）。
　　5、Western-blot結(jié)果表明，2種胃癌細胞株中，添加LOX可以促進PDGFRα和β的表達，24小時添加LOX（r803-LOX-PDGFR-α=0.813,p<0.01;r803-LOX-PDGFR-β=0.829,p<0.01;r823-LOX-PDGFR-α=0.023,p>0.05;r823-LOX-PDGFR-β=0.109,p>0.05）；48小時添加LOX(r803-

7、LOX-PDGFR-α=0.721,p<0.01;r803-LOX-PDGFR-β=0.716,p<0.01;r823-LOX-PDGFR-α=0.904,p<0.01;r823-LOX-PDGFR-β=0.914,p<0.01)；而添加BAPN抑制LOX活性后，PDGFRα和β的表達量相對減少，24小時添加BAPN（r803-BAPN-PDGFR-α=-0.935,p<0.01;r803-BAPN-PDGFR-β=-0.560,p<0

8、.01;r823-BAPN-PDGFR-α=-0.377,p<0.01;r823-BAPN-PDGFR-β=-0.687,p<0.01）；48小時添加BAPN（r803-BAPN-PDGFR-α=-0.793,p<0.01;r803-BAPN-PDGFR-β=-0.872,p<0.01;r823-BAPN-PDGFR-α=-0.301,p<0.05;r823-BAPN-PDGFR-β=-0.858,p<0.01）。
　　6、體外二

9、維培養(yǎng)PAS染色檢測表明，2種胃癌細胞株，應(yīng)用AG1295、AG1296完全抑制PDGFR后，隨著LOX濃度的增加，VM形成的數(shù)量也增加，LOX濃度與VM的形成呈正相關(guān)（rMGC-803-AG1295=0.878，rBGC-823-AG1295=0.825，rMGC-803-AG1296=0.935，rBGC-823-AG1296=0.881,均P<0.05）；而加入BAPN無VM形成。
　　7、體外三維培養(yǎng)檢測表明,2種胃癌細胞

10、株中，應(yīng)用AG1295、AG1296完全抑制PDGFR后，隨著LOX濃度的增加，VM形成的數(shù)量也增加，LOX濃度與VM的形成呈正相關(guān)（rMGC-803-AG1295=0.927，rBGC-823-AG1295=0.935，rMGC-803-AG1296=0.945，rBGC-823-AG1296=0.926,均P<0.05）；加入BAPN后仍無VM形成。
　　結(jié)論：LOX可以增強胃癌細胞的運動，促進胃癌細胞株VM的形成，以促進胃癌