腫瘤細(xì)胞中PKCs的表達(dá)及阿霉酮A對(duì)胃癌細(xì)胞的作用.pdf

1、腫瘤是一種基因疾病，其發(fā)生機(jī)理及抗腫瘤藥物的研發(fā)是當(dāng)前生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)。本文應(yīng)用現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，觀察乳腺癌、胃癌組織中PKCs表達(dá)及與腫瘤分化程度的相關(guān)性，研究PKCa siRNA和阿霉酮A在體內(nèi)外對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823的作用，對(duì)探索腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)理和開發(fā)抗腫瘤藥物及新技術(shù)具有重要的學(xué)術(shù)意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。 首先，研究了蛋白激酶C(Protein Kinase C，PKC)和乳腺癌分化及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。通過免疫組織化

2、學(xué)方法檢測(cè)48例乳腺癌病人手術(shù)標(biāo)本PKC同功酶蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)PKCα和PKCβ與乳腺癌分化程度無顯著相關(guān)性；PKCη與乳腺癌分化程度顯著相關(guān)；PKCζ與乳腺癌分化程度極顯著相關(guān)；通過HE染色顯示的乳腺腫瘤組織與PKC免疫組化的結(jié)果進(jìn)行對(duì)照，發(fā)現(xiàn)PKCη、PKCζ的表達(dá)量在大多數(shù)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌細(xì)胞中明顯增多，且在乳腺腫瘤組織胞漿中的表達(dá)與腫瘤的分化程度高低呈正比關(guān)系，與腫瘤的惡性程度呈反比關(guān)系。 其次，采用免疫組織化學(xué)卵白素生物

3、素過氧化物酶連接法對(duì)80例胃癌標(biāo)本蛋白激酶C同工酶，包括PKCα等蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比研究，探討它們?cè)谖赴┲械谋磉_(dá)水平與腫瘤分化程度的相關(guān)性。結(jié)果表明，在Ⅰ-Ⅱ型與Ⅲ型胃癌中，PKCa陽性率分別為67.5％與19.1％(P<0.05)，在胃癌未轉(zhuǎn)移的病例中，PKCs蛋白表達(dá)水平普遍較高，PKCα與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系有極顯著意義(P<0.01)。此外，PKCs蛋白表達(dá)水平與腫瘤患者的年齡無關(guān)。 接著，研究了PKCα siRNA在體內(nèi)外

4、對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823的作用。構(gòu)建了表達(dá)PKCα siRNA的載體，將之轉(zhuǎn)染入人胃癌細(xì)胞BGC-823中，發(fā)現(xiàn)PKCα siRNA特異性地抑制目的基因的表達(dá)和人胃癌細(xì)胞的增殖，與細(xì)胞增殖相關(guān)基因c-myc、PCNA表達(dá)也出現(xiàn)下調(diào)，提示了PKCα水平變化可影響腫瘤細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，且抑制腫瘤細(xì)胞中腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)基因的表達(dá)。PKCα siRNA經(jīng)陽離子脂質(zhì)體Oligofectamine包裹，采用瘤內(nèi)注射處理，經(jīng)PKCα siRNA處理后的細(xì)

5、胞在裸鼠皮下形成移植瘤的時(shí)間延長(zhǎng)，具有較高的腫瘤抑制率，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其抑瘤率又逐漸下降，與對(duì)照組的差別逐漸縮小，可能是導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的siRNA逐漸降解而失去活性，提示反義基因治療需連續(xù)給藥或加用其它治療才能達(dá)到最佳效果。 最后，研究了本實(shí)驗(yàn)室從海洋微生物分離獲得的化合物阿霉酮A在體內(nèi)外對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823的作用。結(jié)果表明，阿霉酮A在體外能抑制胃癌細(xì)胞BGC-823的生長(zhǎng)，當(dāng)濃度為10μg/mL時(shí)其抑制率為80％，且胃癌細(xì)