大豆鐵蛋白基因的分離和轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁(yè)
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1、鐵蛋白是廣泛存在于生物體中的一種長(zhǎng)期貯藏鐵的蛋白,調(diào)節(jié)鐵的吸收和釋放,是植物貯藏鐵的主要形式。大豆是含鐵量高的植物,其內(nèi)大約90％的鐵以鐵蛋白的形式存在。研究發(fā)現(xiàn)大豆鐵蛋白中鐵的吸收利用率和FeS04基本相當(dāng)。本研究使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法將大豆鐵蛋白Ferritin基因轉(zhuǎn)入玉米,期望在玉米胚乳特異表達(dá)基因15 kDβ-Zein啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)下,特異表達(dá),以提高籽粒中微量元素鐵的含量,為強(qiáng)化玉米營(yíng)養(yǎng)品質(zhì),解決以玉米為主食人群的缺鐵問題提供

2、幫助。主要結(jié)果如下:
　　 1.從玉米自交系魯2548分離獲得胚乳特異表達(dá)基因15 kDβ-Zein的啟動(dòng)子序列,并構(gòu)建了表達(dá)載體pB1121-Zein-GUS。
　　 2.從大豆品種95-5883克隆并獲得大豆鐵蛋白Ferritin基因的cDNA序列,全長(zhǎng)753 bp,包含251個(gè)氨基酸殘基,構(gòu)建植物表達(dá)載體pB1121-35s-Ferritin,pCUbi1390-Ferritin,pB1121-Zein—Ferri

3、tin,pCUbi1390-Ferritin-Epsps。
　　 3.誘導(dǎo)玉米自交系R18-599和齊319的胚性愈傷組織,為遺傳轉(zhuǎn)化提供受體材料。利用三親交配法將重組載體pCUbi1390-Ferritin,pB1121-Zein-Ferritin導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入玉米自交系R18-599和齊319的胚性愈傷組織,得到轉(zhuǎn)基因植株。提取轉(zhuǎn)基因植株的DNA,經(jīng)PCR鑒定,初步證明Ferriti

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