不同代次兔髓核細胞中Ⅱ型膠原和SOX9的表達和實驗研究.pdf

1、[目的]:通過培養(yǎng)不同代次兔髓核細胞，檢測其Ⅱ型膠原和SOX9的含量變化，觀察其細胞生長規(guī)律，從而尋找出生物學性狀最佳的細胞代次作種子細胞。
　　[方法]:取2-3月齡新西蘭大白兔8只，空氣栓塞致死后在無菌條件下取出胸、腰椎段髓核，髓核組織以0.2％Ⅱ型膠原酶充分消化后進行細胞傳代培養(yǎng)。將原代細胞作為對照組（A組，n=8），傳代后的2、3、4、5代細胞分別為B、C、D、E組，倒置相差顯微鏡下觀察不同代次兔髓核細胞的形態(tài)變化，采用M

2、TT法檢測細胞OD值，繪制細胞生長曲線;RT-PCR和免疫組化法檢測不同代次細胞Ⅱ型膠原和SOX9的表達。
　　[結果]:原代細胞（A組）生長緩慢，梭形為主，20-30天達80％融合可傳代;B組生長速度最快，7-10天可達80％融合傳代，C、D、E組髓核細胞生長速度依次減慢，細胞形態(tài)不規(guī)則。RT-PCR和免疫組化法檢測可知A組和B組Ⅱ型膠原及SOX9的表達明顯高于C、D、E三組(P＜0.05)，A、B組之間無顯著性差異(P＞0.0