抗IgE中和抗體表位篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗中，以抗人IgEmAb為靶蛋白，從噬菌體呈現(xiàn)隨機(jī)線性七肽庫篩選與之結(jié)合的肽，經(jīng)過三輪生物淘篩和噬菌體ELISA，我們獲得了48個陽性重組噬菌體克隆。通過結(jié)合力排序，對其中15個顯示與抗人IgEmAb有較強(qiáng)結(jié)合能力的克隆進(jìn)行DNA測序。測序結(jié)果得到：10個噬菌體克隆為DHIDMGL，1個噬菌體克隆為DHMWLGL，3個噬菌體克隆為DHQDAGF，1個是噬菌體DHMDQNL。網(wǎng)上蛋白BLAST未發(fā)現(xiàn)有已知的相同序列。用多序列比對程序C

2、LUSTALW進(jìn)行序列比對及與IgE的比較。發(fā)現(xiàn)篩得的7肽序列有相似的骨架區(qū)和同源性，并與IgE的CH3區(qū)有較高同源性。競爭性ELISA結(jié)果顯示4個序列均能與IgE競爭性結(jié)合抗人IgEmAb，說明篩選所得7肽可與抗人IgEmAb特異性結(jié)合。并直接以重組噬菌體免疫小鼠，獲得的小鼠抗血清點(diǎn)雜交結(jié)果顯示有抗IgE mAb的產(chǎn)生。為了進(jìn)一步證明篩選得到的序列在脫離了噬菌體之后仍具有與抗人IgEmAb結(jié)合的能力，應(yīng)用MAP合成肽，KLH合成肽，

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