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1、本實(shí)驗(yàn)中,以抗人IgEmAb為靶蛋白,從噬菌體呈現(xiàn)隨機(jī)線性七肽庫(kù)篩選與之結(jié)合的肽,經(jīng)過(guò)三輪生物淘篩和噬菌體ELISA,我們獲得了48個(gè)陽(yáng)性重組噬菌體克隆。通過(guò)結(jié)合力排序,對(duì)其中15個(gè)顯示與抗人IgEmAb有較強(qiáng)結(jié)合能力的克隆進(jìn)行DNA測(cè)序。測(cè)序結(jié)果得到:10個(gè)噬菌體克隆為DHIDMGL,1個(gè)噬菌體克隆為DHMWLGL,3個(gè)噬菌體克隆為DHQDAGF,1個(gè)是噬菌體DHMDQNL。網(wǎng)上蛋白BLAST未發(fā)現(xiàn)有已知的相同序列。用多序列比對(duì)程序C
2、LUSTALW進(jìn)行序列比對(duì)及與IgE的比較。發(fā)現(xiàn)篩得的7肽序列有相似的骨架區(qū)和同源性,并與IgE的CH3區(qū)有較高同源性。競(jìng)爭(zhēng)性ELISA結(jié)果顯示4個(gè)序列均能與IgE競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抗人IgEmAb,說(shuō)明篩選所得7肽可與抗人IgEmAb特異性結(jié)合。并直接以重組噬菌體免疫小鼠,獲得的小鼠抗血清點(diǎn)雜交結(jié)果顯示有抗IgE mAb的產(chǎn)生。為了進(jìn)一步證明篩選得到的序列在脫離了噬菌體之后仍具有與抗人IgEmAb結(jié)合的能力,應(yīng)用MAP合成肽,KLH合成肽,
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