淋巴瘤病人Fab噬菌體抗體庫的建立.pdf

1、目的：建立淋巴瘤病人Fab噬菌體抗體庫，篩選并富集特異性抗體。方法：取病理證實(shí)為B淋巴細(xì)胞瘤的病人20例，每個人抽10ml血液，故新鮮血液共200ml，分離淋巴細(xì)胞，提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，設(shè)計(jì)多對引物，以PCR擴(kuò)增抗體輕鏈和重鏈Fd段。輕鏈PCR產(chǎn)物和噬粒載體pComb3經(jīng)Sac I和Xba I酶切，由T4 DNA連接酶連接，熱轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌XL1-Blue，擴(kuò)增后提取噬粒，構(gòu)建輕鏈庫。輕鏈庫和重鏈Fd段PCR產(chǎn)

2、物經(jīng)Xho Ⅰ和SpeⅠ酶切，以同樣方法連接后轉(zhuǎn)化XL1-Blue，加入輔助噬菌體VCSM13，產(chǎn)生噬菌體抗體全庫。提取噬粒酶切鑒定輕鏈庫和全庫有無插入片段。分別以噬菌體全庫和提取的噬粒為模板，以輕、重鏈不同引物組合進(jìn)行擴(kuò)增構(gòu)建抗體庫。結(jié)果：提取的淋巴細(xì)胞總RNA及逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA質(zhì)量好，部分重鏈Fd段、部分K輕鏈和入輕鏈得到擴(kuò)增。Fab全庫庫容達(dá)6.6×108，酶切和PCR顯示有插入片段。結(jié)論：本研究構(gòu)建的人天然段噬菌體抗