鼠源噬菌體抗體庫(kù)的建立及e.acervulina裂殖子單鏈抗體的篩選

1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鼠源噬菌體抗體庫(kù)的建立及E.acervulina裂殖子單鏈抗體的篩選姓名：高英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：秦建華20080607C o n s t r u c t i o n o f a P h a g e d i s p l a y A n t i b o d y l i b r a r y a n d S e l e c t i o n o f s p e c i a lS c F va g

2、a i n s t t h e M e r o z o i t e o f E ．a(chǎn) c e r v u l i n aA u t h o r ：．G a oY ' m gA d v e s o r ：P r o f ．Q i nJ i a n - h u aM a j o r ：P r e v e n t i v e V e t e r i n a r yM e d i c i n eA b s t r a c tC o c

3、c i d i o s i s c o u s e d b y E i m e r i a i s av e r y s e v e r a l g l o b a l l y p s r a s i t o s i s t o e f f e c tp o u l t r y ．N o wc o c c i d i o s i s i ss t i l lm a i n l yc o n t r o l l e dw i m m e

4、d i c a t i o n ．O w i n g t ot h er e p e a t e da p p e a r a n c eo f d r u g - r e s i s t a n ts t r a i n so f c o c e i d i o s i s ，t h ee x p e n s i v e c o s t so f n e w a n t i c o c e i d i a ld r u gb e i

5、n gd e v e l o p e d a n d t h e s e r i o u sp r o b l e m so f d r u g r e s i d u e si np o u l t r yp r o d u c t i o n , t h ed e v e l o p m e n t o f v a c c i n e a g a i n s t c o c c i d i o s i s b e c o m e s

6、m o r e i m p o r t a n t i nr e c e n t y e a r s ．T o t a lR N A w a s e x t r a c t e df r o mt h es p l e e nc e l l so f B A L B ／cm i c e ．T h ef r i s tc h a i no fc D N A w h i c hd e r i v e df r o mt h et o t a

7、 l R N A w i t hO l i g o ( d T ) l s P r i m e rb yR T w a su s e d 勰t e m p l a t e ，V Ha n dV L g e n e sw a sa m p l i f i e db yP C R u s i n gg o n es p e c i f i cp r i m e r s ．P C Rp r u d u c tb ee x a m i n e

8、db ya g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i sa n dp u r i f i e d b ya g a r o s eg e lD N Ap u r i f i c a t i nk i t ，t h er e s u l ts h o w s t h eg e n e s o f V H a n d V L a m p l i f i e dw e r ea b o u t4

9、2 0 b pa n d3 9 0 b pr e s p e c t i v e l y ．A n d j o i n e d b yaD N A l i n k e r e n c o d i n gp e p t i d e a s as i n g 且e - c h a i nF v ( S c F v ) F r a g m e n t w i t h S e E - P C R , S c F v W a s a b o u

10、t 7 5 0 b p a n d t h e 驢I a n dN o t Ir e s t r i c t i o ns i t ew e r ei n l e ti ni t ．P C R p r o d u c t sw e r e p u r i f i e df r o mg e l t h e nW eo a ng e t t h e S c F v g e n e ．T h e S c F v g e n e r e p

11、e r t o i r e s W e r e o v e r d i g e s t e d b y 妒I a n dN o t Is e p a r a t e l y ．T h e l i g a t i o nm i x e so f S c F va n dP C A N T A B - 5 E W e r et r a n s f o r m e di n t oE ．c o l iT G I ．R e s u l ts h

12、 o w e d t h a tS c F vg e n e W a sc o r r e c t l y i n s e r t e di n t op h a g e m i dv e c t o r i nf r a l ' n e ．T h o s ea r n p l i c i l l i n r e s i s t a n t b a c t e r i a c o l o n i e s w e r es c r

13、 a p e d i n t o L Bm e d i u ma n ds u p e r i n f e c t e db yM 1 3 K 0 7h e l p e rp h a g e ．A f t e ro v e r n i g h ti n d u c t i o ni n L B —A Km e d i u mc o n t a i n i n gn og l u c o s e ，w eg o tr e c o m b

14、i n a n tS c F vp h a g e ．T h ep h a g ea n t i b o d yl i b r a r yW a sp a n n e du s i n g t h em e r o z o i t eo f E i m e r i a a c e r v u l i n a ．A f t e rf o u rr o u n d so f p a n n i n g ，E L I S AW a s p e

15、 r f o r m e d t o d e t e r m i n e t h e s p e c i f i c i t y o ft h e p h a g ea n t i b o d y ．S t r o n g l y p o s i t i v er e c o m b i n a n tp h a g ec l o n e sw e r eu s e dt oi n f e c t l o g - p h a g eE

16、．c o l i H B 2 15 1 ．E x p r e s s i o n o fs o l u b l eS c F vW a si n d u c e db y a d d i n gI P T G a n dt h ec u l t u r e s g r o w n ．T h eM w o fS c F vi sa b o u t 3 2 K D b y S D S —P A G E ．M o u s e S c F v

17、p h a g e d i s p l a y l i b r a r y W a s c o n s t r u c t e ds u c c e s s f u l l ya n d w e g o tt h e s p e c i a lS c F v g e n ea g a i n s t t h e m e r o z o i t e o f E i m e r i a a c e r v u l i n a ．K e y