NF-κB抑制劑對(duì)慢性阻塞性肺病氣道、肺血管重構(gòu)的防治研究.pdf

1、目的: ①動(dòng)態(tài)檢測慢性阻塞性肺病( chronic obstructive pulmonary disease,COPD)各發(fā)展階段肺組織氣道、肺動(dòng)脈重構(gòu)的進(jìn)展。②了解核因子-κB(the nuclear factor-κB,NF-κB)在COPD各階段動(dòng)態(tài)變化情況,以及NF-κB與氣道、肺血管重構(gòu)的關(guān)系。③觀察NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)對(duì)COPD各發(fā)展階段

2、肺組織氣道、肺動(dòng)脈重構(gòu)的影響,分析藥物的防治效果。
　　方法: 將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為八個(gè)組,分別納入實(shí)驗(yàn)組及藥物干預(yù)組,每組6只。實(shí)驗(yàn)組為:A、B、C、D。正常對(duì)照組(A):正常飼養(yǎng)4周;慢支組(B):于實(shí)驗(yàn)第1、14天經(jīng)氣道內(nèi)注入脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),200μg/次,4周后檢測;COPD組(C):第1、14天經(jīng)氣道內(nèi)注入LPS,200μg/次,熏香煙1h/天,共4周;COPD并肺動(dòng)脈高

3、壓組(D):第1、14天經(jīng)氣道內(nèi)注入LPS,200μg/次,熏香煙1h/天,共6周,實(shí)驗(yàn)的最后兩周在熏香煙的同時(shí),給予18％低氧8 h/天。PDTC藥物干預(yù)組為:A1(空白對(duì)照組)、B1(慢支干預(yù)組)、C1(COPD干預(yù)組)、D1(COPD并肺動(dòng)脈高壓干預(yù)組)。動(dòng)物模型制作同各對(duì)應(yīng)組,從第3周起給各藥物干預(yù)組腹腔注射 PDTC,劑量100mg·kg-1·d-1。A1組從第三周起腹腔注射同PDTC劑量相同的生理鹽水。各組測定氣道阻力、肺血

4、流動(dòng)力學(xué)和右心室肥厚指數(shù),分別對(duì)肺組織行HE染色和三聯(lián)染色,觀測氣道炎癥,氣道重構(gòu)以及肺小動(dòng)脈的病理形態(tài)學(xué)改變。用免疫組化法檢測各組肺組織中NF-κB蛋白的表達(dá),用 RT-PCR、Western Blot分別檢測各組肺組織勻漿中 NF-κB mRNA和NF-κB蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果: ①與A組相比,C、D組氣道阻力明顯增大(P<0.05)。②C、D組右心室收縮壓(right ventricular systolic pres

5、sure,RVSP)平均肺動(dòng)脈壓力(mean pulmonary arterial pressure,mPAP)和右心室游離壁/左心室+室間隔(the ratio of the weight of right ventricle/left ventricle and septum,RV/LV+S)都明顯高于A組(P<0.05)。D組RVSP高于C組(P<0.05)。C組與D組間RV/LV+S差異無意義(P>0.05)。C1與C組、D1與

6、D組比較RVSP、mPAP值降低(P<0.05)。D1組的RV/LV+S值較D組降低(P<0.05)。③與A組比較,C、D組氣道重構(gòu)指標(biāo)細(xì)支氣管管壁厚度與氣管外徑比值(MT%)、管壁面積和氣管總面積比值(MA%)均明顯增高(P<0.05)。C、D組間MT%、MA%無差異(P>0.05)。C1組與C組,D1組與D組比較,細(xì)支氣管MT%、MA%均下降(P<0.05)。④肺血管重構(gòu)分析提示,與A組相比,C、D組肌化型動(dòng)脈百分比增多(P<0.0

7、5),但C組尚未出現(xiàn)肺血管壁的增厚(P>0.05);D組肺小動(dòng)脈管壁厚度與血管外徑比值(WT%)、管壁面積與血管總面積比值(WA%)比值增大(P<0.05),說明出現(xiàn)明顯的肺血管重構(gòu)。與各實(shí)驗(yàn)組相比,C1、D1組肌化型動(dòng)脈百分比降低(P<0.05),非肌化型動(dòng)脈百分比增高(P<0.05)。D1組較D組WT%、WA%比值有所減小(P<0.05)。⑤免疫組化結(jié)果顯示,C、D組NF-κB蛋白表達(dá)強(qiáng)于A組(P<0.05),C1、D1組較實(shí)驗(yàn)組C

8、、D組NF-κB蛋白含量下降(P<0.05)。⑥RT-PCR結(jié)果說明,與A組相比,C、D組NF-κB mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05),C組與D組間NF-κB mRNA表達(dá)也有差異(P<0.05)。C1組較C組、D1組較D組NF-κB mRNA表達(dá)減弱(P<0.05)。⑦Western Blot電泳結(jié)果顯示,與A組相比,C、D組NF-κB蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05), D組較C組NF-κB蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)。C1組較C組、

9、D1組較D組NF-κB蛋白表達(dá)明顯較弱(P<0.05)。⑧NF-κB的表達(dá)與氣道重構(gòu)指標(biāo)MT%、 MA%,肺血管重構(gòu)指標(biāo)WT%、WA%均呈正相關(guān)(P<0.01)。
　　結(jié)論: ①COPD早期已出現(xiàn)肺血流動(dòng)力學(xué)變化,隨疾病進(jìn)展逐漸出現(xiàn)進(jìn)行性加重的肺血管、氣道重構(gòu)。表現(xiàn)為肺腺泡內(nèi)肌化型動(dòng)脈百分比增高、肌化型動(dòng)脈管壁增厚;氣道阻力增加、肺內(nèi)小氣道平滑肌層增厚。②隨COPD病程進(jìn)展,可檢測到肺組織內(nèi)NF-κB的表達(dá)增強(qiáng),NF-κB的表達(dá)水