白藜蘆醇及其煙酸酯抗腫瘤作用研究.pdf

1、本文為了進(jìn)一步提高白藜蘆醇的穩(wěn)定性、增強(qiáng)活性，對(duì)白藜蘆醇(resveratrol，Res)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了煙酸酯化修飾，前期的藥理實(shí)驗(yàn)表明白藜蘆醇煙酸酯(resveratroltrinicotinate，ResT)較白黎蘆醇具有更強(qiáng)的中樞作用。采用腫瘤細(xì)胞體外藥敏實(shí)驗(yàn)和腫瘤動(dòng)物模型體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)，全面觀察白藜蘆醇結(jié)構(gòu)修飾物-白藜蘆醇煙酸酯的抗腫瘤作用，同時(shí)以人肝癌細(xì)胞(HepG2)為靶細(xì)胞對(duì)其抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討，為白藜蘆醇煙酸酯用于腫

2、瘤的防治提供理論基礎(chǔ)。 1、白藜蘆醇及其煙酸酯體內(nèi)抗腫瘤作用的比較。采用荷瘤小鼠模型(肝癌H22和肉瘤S180)分別檢測(cè)ResT、Res的抗腫瘤作用。光鏡觀察腫瘤組織病理改變；通過測(cè)定脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、血細(xì)胞計(jì)數(shù)等指標(biāo)觀察ResT、Res對(duì)機(jī)體免疫功能的影響。結(jié)果表明：ResT、Res25，50，100mg/kg連續(xù)灌胃給藥14d后對(duì)小鼠肉瘤S180的平均抑瘤率依次為38.1％，49.4％，62.2％及30.6％，41.4％，

3、54.8％，與對(duì)照組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；對(duì)人肝癌(H22)的平均抑瘤率依次為35.9％，45.5％，56.6％及30.1％，38.3％，50.2％，與對(duì)照組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中，ResT在50和100mg/kg劑量下對(duì)S180和H22的抑瘤率與相同劑量組Res比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)兩化合物對(duì)免疫功能均無顯著影響。光鏡觀察結(jié)果顯示ResT、Res可引起腫瘤組織不同程度上的壞死。 2、白藜蘆醇及其煙酸酯體外抗腫瘤作用比較實(shí)驗(yàn)。采用噻唑

4、藍(lán)還原法(MTT法)分別檢測(cè)ResT、Res對(duì)體外培養(yǎng)的人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人肝癌細(xì)胞(HepG2)及人肺癌細(xì)胞(A549)的生長(zhǎng)抑制作用，同時(shí)光鏡觀察ResT對(duì)HepG2細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。結(jié)果表明：ResT對(duì)Hela、HepG2、A549的IC50依次分別為120、90、143μmol/L；Res對(duì)三種細(xì)胞的IC50依次分別為63、54、78μmol/L。倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)ResT作用于HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞核/漿比減小，細(xì)胞

5、核出現(xiàn)固縮、分化現(xiàn)象，提示有可能發(fā)生凋亡。 3、白藜蘆煙酸酯誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究。應(yīng)用Hochest熒光染色法觀察細(xì)胞凋亡的發(fā)生；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)分析細(xì)胞周期和凋亡率；分別采用免疫組織化學(xué)法和免疫印跡(Westrnblot)檢測(cè)ResT對(duì)HepG2細(xì)胞Caspase-3、Bcl-xL、Bax表達(dá)的影響。結(jié)果表明：ResT作用后，HepG2細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)改變，F(xiàn)CM分析顯示大部分細(xì)胞阻滯于G1期，S

6、期細(xì)胞比例降低。DNA含量直方圖上出現(xiàn)亞二倍體峰即凋亡峰。免疫組織化學(xué)法和免疫印跡結(jié)果顯示ResT作用后，HepG2細(xì)胞Caspase-3、Bax蛋白的表達(dá)增加，而Bcl-xL表達(dá)則降低。 綜上所述，本研究表明ResT不僅保留了母體藥物Res的細(xì)胞毒活性，且體內(nèi)抗腫瘤作用優(yōu)于母體藥物本身。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡是ResT抗腫瘤作用機(jī)制之一，其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能機(jī)理為：改變HepG2細(xì)胞Bcl-xL/Bax的表達(dá)比例，促進(jìn)細(xì)