2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本研究以自發(fā)性2型糖尿病模型-db/db小鼠為實(shí)驗(yàn)研究對象,通過檢測相關(guān)指標(biāo)來了解自主合成的倍半萜烯內(nèi)酯類化合物衍生物對小鼠血糖、血胰島素、血脂、炎癥因子及胰島細(xì)胞中NF-κB、iNOS、Bcl-2、Bax等表達(dá)的影響,觀察胰島的形態(tài)改變,探討這種新的衍生物對2型糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
  方法:
  SPF級(jí)15周齡db/m小鼠12只、db/db小鼠24只,雌雄各半,給所有小鼠予基

2、礎(chǔ)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,db/mn小鼠設(shè)為正常對照組(n=12),db/db小鼠隨機(jī)分為2組:糖尿病模型組(n=12)、倍半萜烯內(nèi)酯類化合物衍生物干預(yù)組(ACT001干預(yù)組,n=12)。ACT001干預(yù)組db/db小鼠每日固定時(shí)間給予ACT001混懸液25mg/kg灌胃1次,正常對照組及糖尿病模型組小鼠分別給予相應(yīng)劑量的生理鹽水灌胃,各組小鼠自由進(jìn)食飲水,各組小鼠監(jiān)測體重和血糖。小鼠禁食12小時(shí)后,從其尾靜脈取血檢測血糖。灌胃給藥12周

3、后實(shí)驗(yàn)結(jié)束,處死小鼠。將小鼠予戊巴比妥鈉麻醉后,留其取血標(biāo)本用于檢測血清胰島素、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterole,TC);留取小鼠胰腺組織標(biāo)本用于檢測組織NF-κB、iNOS、Bcl-2、Bax的表達(dá)。
  1.血清學(xué)指標(biāo)的測定
  小鼠空腹血糖用羅氏ACCU-CHEK血糖儀測定;血清胰島素用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent a

4、ssay,ELISA)試劑盒測定,小鼠血TG、TC等指標(biāo)均用全自動(dòng)生化分析儀測定。
  2.血脂的測定和IL-1β、TNF-α含量的測定
  小鼠血清IL-1β、TNF-α用ELISA試劑盒測定。
  3.小鼠胰腺組織形態(tài)學(xué)檢查
  取小鼠胰腺尾部組織用4%多聚甲醛固定24小時(shí)后,經(jīng)梯度酒精脫水,予石蠟包埋,將石蠟切片,切片厚度約為4μm,予HE染色觀察胰島的一般形態(tài)學(xué)變化,免疫組化染色檢測小鼠胰島細(xì)胞團(tuán)NF-κ

5、B、iNOS、Bcl-2、Bax表達(dá)的變化。
  4.免疫印跡法(Western blot)檢測各組小鼠胰腺組織中NF-κB、iNOS蛋白表達(dá)的變化。
  5.統(tǒng)計(jì)方法
  本實(shí)驗(yàn)所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示,所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)由統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0進(jìn)行分析完成;各組間均數(shù)采用兩樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較,多組間樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-Way analysis of variance,ANOV

6、A);若方差不齊時(shí),組間均數(shù)比較用Welch檢驗(yàn),兩兩比較用Dunnett's T3方法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  結(jié)果:
  1.各組小鼠一般情況的變化
  正常對照組小鼠一般情況良好,精神狀態(tài)佳,活動(dòng)自如,毛發(fā)亮澤,飲食及大小便無異常,未見死亡;糖尿病模型組、ACT001干預(yù)組小鼠一般情況較差,精神狀態(tài)欠佳,行動(dòng)緩慢,毛發(fā)雜亂無光,有脫發(fā)、皮疹,出現(xiàn)了多飲多尿多食等糖尿病相關(guān)癥狀;與糖尿病模型組比較,

7、ACT001干預(yù)組小鼠上述情況均有所改善。
  2.各組小鼠體重的變化
  干預(yù)12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,與正常對照組小鼠相比較,糖尿病模型組、ACT001干預(yù)組小鼠體重明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);糖尿病模型組與ACT001干預(yù)組相比體重未見明顯差異。
  3.各組小鼠血清學(xué)指標(biāo)的變化
  干預(yù)12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,與正常對照組小鼠相比較,糖尿病模型組、ACT001干預(yù)組小鼠空腹血糖、胰島素濃度、TG、TC均

8、明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與糖尿病模型組小鼠比較,ACT001干預(yù)組小鼠上述指標(biāo)有降低(P<0.05)。
  4.各組小鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)水平的變化
  干預(yù)12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,與正常對照組小鼠比較,糖尿病模型組、ACT001干預(yù)組小鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)水平均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與糖尿病模型組小鼠比較,ACT001干預(yù)組小鼠血IL-1β、TNF-α表達(dá)水平均有

9、降低(P<0.05)。
  5.各組小鼠胰腺組織形態(tài)學(xué)變化:
  HE染色顯示:正常對照組小鼠胰腺組織鏡下胰島數(shù)量多,呈團(tuán)索狀,為圓形或類圓形,胞漿豐富,形態(tài)完整,細(xì)胞核居中、胞界清晰;糖尿病模型組小鼠胰島數(shù)量較少,分布零散,形態(tài)不規(guī)則,邊緣不整齊,界限不清晰,細(xì)胞體積增大,細(xì)胞核呈偏心分布,可見空泡狀變性;與糖尿病模型組小鼠相比較,ACT001干預(yù)組小鼠的胰島形態(tài)改變有較明顯的改善。
  免疫組化染色顯示:與正常對照

10、組小鼠比較,糖尿病模型組、ACT001干預(yù)組小鼠胰島細(xì)胞中NF-κB、iNOS及促凋亡因子Bax表達(dá)明顯增強(qiáng),抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與糖尿病模型組小鼠比較,ACT001干預(yù)組小鼠胰島細(xì)胞中NF-κB、iNOS、Bax表達(dá)有減弱,Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)。
  6.蛋白免疫印跡法檢測各組小鼠NF-κB、iNOS蛋白表達(dá)的變化
  與正常對照組小鼠比較,糖尿病模型組、ACT00

11、1干預(yù)組小鼠胰島細(xì)胞中NF-κB、iNOS蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與糖尿病模型組小鼠比較,ACT001干預(yù)組小鼠胰島細(xì)胞中NF-κB、iNOS蛋白表達(dá)有明顯減弱(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.db/db小鼠與db/m小鼠相比,體重、進(jìn)食量、飲水量增加,空腹血糖、血脂升高,胰島素濃度增加。
  2.db/db小鼠與db/m小鼠相比,血清中IL-1β、TNF-α產(chǎn)生和釋放增多。
 

12、 3.db/db小鼠與db/m小鼠相比,胰島細(xì)胞中NF-κB、iNOS、Bax表達(dá)增強(qiáng),以及Bcl-2表達(dá)減弱,這可促使胰島β細(xì)胞功能受損,凋亡增加。
  4.倍半萜烯內(nèi)酯類化合物衍生物可降低db/db小鼠空腹血糖、血脂、胰島素濃度及減少血清中IL-1β、TNF-α的表達(dá)和釋放。
  5.倍半萜烯內(nèi)酯類化合物衍生物可抑制db/db小鼠胰島細(xì)胞中NF-κB的激活,下調(diào)iNOS的表達(dá),改善胰島β細(xì)胞功能受損,減少β細(xì)胞凋亡的發(fā)生

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