抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體增強姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌抑制效應(yīng)的實驗研究.pdf

1、第一部分姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌體外抑制效應(yīng)的研究
　　 目的:了解姜黃素在體外對雄激素非依賴性前列腺癌細胞的抑制效應(yīng)。
　　 方法:采用不同濃度的姜黃素（6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于雄激素非依賴性前列腺癌細胞，MTT法檢測姜黃素對細胞生長活性的影響。然后分別采用CFSE染色、Annexin V-PI染色和PI染色法，使用流式細胞儀分析姜

2、黃素對PC-3細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L 四個濃度的姜黃素處理24小時后，PC-3細胞的活性未受顯著影響；而100μmol/L的姜黃素則對PC-3細胞產(chǎn)生顯著的細胞毒性作用。50 μmol /L的姜黃素作用后，PC-3細胞的增殖指數(shù)從7.08±0.20降到 4.38±0.19 ；凋亡率從(5.34±0.96)％提高到(

3、21.53±2.87)％；G2/M期細胞比例由(34.27±1.87)％上升到(57.29±1.91)％。
　　 結(jié)論:姜黃素能在體外顯著抑制非依賴性前列腺癌細胞的增殖，誘導(dǎo)細胞凋亡并導(dǎo)致細胞周期的阻滯。
　　 第二部分姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌細胞內(nèi)信號通路活性的影響
　　 目的:明確姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌細胞內(nèi)信號通路活性的影響，探討姜黃素抗瘤效應(yīng)產(chǎn)生的可能機制。
　　 方法:采用熒光素酶

4、報告基因系統(tǒng)檢測姜黃素在體外對核因子-κB (NF-κB、激活蛋白-1 (AP-1)、Elk1、CHOP和CREB 五個信號通路的影響，以帶有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒（pNF-κB-Luc，pAP-1-Luc，pElk1-Luc，pCHOP-Luc，pCREB-Luc）轉(zhuǎn)染PC-3細胞，姜黃素干預(yù)后，檢測熒光素酶活性。
　　 結(jié)果:熒光素酶活性檢測結(jié)果顯示，姜黃素能在體外顯著抑制NF-κB和AP-1 兩個細胞內(nèi)信號通路的活性，而對

5、Elk1、CHOP和CREB 三個信號通路的活性影響不明顯。
　　 結(jié)論:姜黃素可能通過抑制NF-κB和AP-1 信號通路發(fā)揮抑癌效應(yīng)。
　　 第三部分抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體增強姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌的抑制效應(yīng)
　　 目的:檢測抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體（TfR mAb）對雄激素非依賴性前列腺癌細胞生物學(xué)行為的影響，了解抗人TfR mAb對姜黃素抗瘤作用的增強效應(yīng)。
　　 方法:利用雜交瘤細胞

6、株制備抗人TfR mAb，分別采用CFSE染色、Annexin V-PI染色和PI染色法檢測抗人TfR mAb對PC-3細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響。采用FITC標(biāo)記的鼠抗人TfR mAb檢測姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達的影響。采用流式細胞儀進一步檢測抗人TfR mAb聯(lián)合姜黃素對PC-3細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響。
　　 結(jié)果:抗人TfR mAb對PC-3細胞增殖、凋亡和細胞周期無顯著影響。姜黃